实验五（二） 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳.pptVIP

电泳分离、分析和鉴定带电粒子 在一定的电场条件下，每一种分子都具有特定的电荷、大小及形状，在一定时间内它们在相同电场中泳动速度不同，各自集中在特定的位置上而形成紧密的泳带，进而达到分离目的。 实 验 目 的 掌握醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质的基本原理 ; 熟悉基本操作过程; 了解方法学评价和临床意义 。 * * 醋酸纤维薄膜电泳法 分离血清蛋白质 实 验 原 理 本实验是以醋酸纤维素薄膜作为支持物的区带电泳。 本实验将少量血清用点样器点在浸有缓冲液的醋酸纤维薄膜上，薄膜两端经过滤纸与电泳槽中缓冲液相连，所用缓冲液pH值为8.6，血清蛋白质在此缓冲液中均带负电荷，在电场中向正极泳动； 由于血清中不同蛋白质带有的电荷数量及分子量不同而泳动速度不同。带电荷多、分子量小者泳动速度快；带电荷少、分子量大者泳动速度慢，从而彼此分离； 电泳后，将薄膜取出，经染色和漂洗，薄膜上显示出五条蓝色区带，每条带代表一种蛋白质，按泳动快慢顺序，各区带分别为清蛋白、α1-球蛋白、 α2-球蛋白、 β-球蛋白和γ-球蛋白。 实 验 原 理 由于染色时染料与蛋白的结合量与区带中的蛋白量成正比，因此，将蛋白染色区带剪下，经洗脱、比色或经透明处理后直接用光密度计扫描，即可计算出各区带蛋白的相对百分数。 实 验 原 理 一、试剂 (1)新鲜血清 (2)巴比妥-巴比妥钠缓冲