实验五（一） 蛋白质电泳技术.pptVIP

五、凝胶系统 根据缓冲液的pH值和凝胶孔径差异，分为连续凝胶系统和不连续凝胶系统。 连续系统：电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。 不连续系统：缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度均不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均比前者好，目前使用最广泛。 3.浓缩效应 浓缩胶的凝胶浓度小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，样品移动的速度较快；分离胶孔径小，样品移动慢，由于凝胶孔径的不连续性使样品迁移受阻而压缩成很窄的区带，最终样品几乎能同时进入分离胶进行分离。 为进一步精确测定未知物的pI，还可选择较窄范围的两性电解质进行电泳，以提高分辨率。如实验时，无标准pI蛋白质作标定依据，则电泳后立即用表面微电极每隔0.5cm直接测定胶板的pH值，制作pH梯度曲线，染色后根据迁移距离推知某种蛋白质的pI。 思考题 1、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳原理上有何不同？ 2、用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的分子量，为什么有时和凝胶层析法所得结果有所不同？是否所有的蛋白质都能用SDS-凝胶电泳法测定其分子量？为什么？ 3、进行聚丙烯酰胺等电点聚焦电泳时的注意事项有