第26章 酶促反应法测定生物化学物质【参考】.pptVIP

第*页 第*页 ① 该法测定血浆NH4+具有快速、特异性高、微量的特点； 氨循环-合成酶-脱氢酶系统测定血浆NH4+性能评价 ② 在技术上酶法不需预先分离氨，没有碱水解步骤，减少了阳性偏差。 第*页 第五节 酶激活和酶抑制测定法 一、无机离子测定： （一）丙酮酸激酶法测定钾离子 （二）β-半乳糖苷酶法测定钠离子 （三）淀粉酶法测定氯离子 （四）异柠檬酸脱氢酶法测定镁离子 1 酶激活和酶抑制 测定法 二、微量元素测定： （一）超氧化物歧化酶法测定铜离子 （二）碳酸酐酶法测定锌离子 三、有机磷测定 第*页 概述 第*页 1 酶激 活剂 Mg2+ Zn2+ K+ Cl- 第*页 第*页 第*页 Add Title Click to edit title style Click to edit title style Click to edit title style Click to edit title style Click to edit title style Click to edit title style 无机离子、微量元素 可使该酶重新具有活性 利用一些物质抑制酶的活性 酶激活 酶抑制 根据酶活性被抑制的程度来测定其抑制物浓度，称为酶抑制剂法，如有机磷的测定。 第*页 第*页 丙酮酸激酶法测定钾离子 磷酸烯醇式丙酮酸和 ADP在丙酮酸激酶（PK）的催化下，可生成丙酮酸和ATP，丙酮酸又与LDH系统偶联，经LDH催化生成乳酸的同时，NADH氧化成NAD＋，钾离子的存在可使PK活性显著增强，故NADH在340nm吸光度的变化可间接反映血清钾离子的浓度。 第*页 第*页 第*页 β-半乳糖苷酶法测定钠离子 邻硝基苯-β-D-半乳糖（ONPG）在钠依赖性β-半乳糖苷酶作用下生成半乳糖和邻硝基苯酚，后者的生成速率与标本中钠离子的浓度成正比，在405nm波长处检测邻硝基苯酚的变化可计算出钠离子的含量。 第*页 第*页 第*页 第*页 淀粉酶法测定氯离子 α-淀粉酶可催化2-氯-4-硝基苯-α-D-麦芽三糖苷（CNP-G3）解离生成2-氯-4-硝基-（CNP）和麦芽三糖（G3），CNP的最大吸收峰在405nm，连续监测405nm吸光度变化可直接反映CNP生成量，其与酶活力成正比。氯离子是α-淀粉酶的激动剂，因此反应速率的变化可反映氯离子的浓度。 第*页 第*页 第*页 第*页 第*页 异柠檬酸脱氢酶法测定镁离子 在适当浓度的两种金属螯合剂EDTA和GEDTA（乙二醇二乙醚二胺四乙酸）中，用镁离子作为激活剂，通过异柠檬酸脱氢酶（ICD）催化异柠檬酸脱氢，使NADP＋还原成NADPH。在同样的条件下，与镁的标准液比较，即可求得血清镁的含量。 第*页 第*页 ① 酶激活剂法在检测无机离子时与其他传统测定方法相比具有较为明显的优势和更为广阔的应用前景，它具有酶法常有的优点且抗干扰能力较强； 酶激活剂法测定无机离子 性能评价 ②测定钾离子需要注意的是：当氨离子在有锰或镁离子存在时对PK有显著的激活作用，故需用GDH消除NH4＋的干扰； ③淀粉酶法测定氯离子时所需底物分子量小、用量少和不需加用辅助酶，测定成本相对较低，同时其线性范围较宽，特异性与稳定性好，其突出优点是表现在抗干扰方面，不易受卤族元素溴、碘及硫氰酸等阴离子的干扰。 第*页 第*页 第*页 第*页 第*页 第*页 超氧化物歧化酶法测定 铜离子 黄嘌呤（xanthine）在黄嘌呤氧化酶（XO）的作用下可以生成O2-，该物质可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲臜，后者在560nm处有强吸收，而SOD可清除O2-，从而抑制了甲臜（NBT Formazan）的形成。反应液的颜色（蓝色）越深，说明SOD活性愈低，间接的反映血清中Cu2+离子的浓度，吸光度与浓度成反比。 第*页 第*页 第*页 第*页 第*页 第*页 第*页 碳酸酐酶法测定锌离子 将标本加入试剂中，标本中的锌即与无活性的碳酸酐酶结合，形成有活性的碳酸酐酶，催化醋酸对硝基酚生成黄色的对硝基酚，在405nm附近有吸收峰。在一定反应时间内，生成的对硝基酚吸光度变化速率大小与锌浓度成正比。 第*页 第*页 第*页 ①超氧化物歧化酶法相比于化学法而言，方法简便，灵敏度高，特异性好。但O2- 的生成速率对于方法的灵敏度有较大的影响； 酶激活剂法测定微量元素 性能评价 ②经预处理后血清、发样、尿液均可采用此法检测； ③碳酸酐酶法测定生物样品中锌含量的方法克服了化学比色法测定锌所具有的试剂空白吸光度高、干扰因素多、准确度差以及水合氯醛、氰化钾等试剂具有毒害性等方法学缺陷，试剂稳定，各项方法学性能均达到所规定的要求，适合于自动生化分析仪检测。 第*页 第*页 有机