苏教版高中生物选修一4.2《分子生物学技术》教学课件（共31张）.ppt

结束放映 模板来自于 / * 第四章 生物化学与分子生物学技术实践 第二节 分子生物学技术 1.根据DNA复制的原理及过程，理解PCR技术的原理及过程。（重点） 2.掌握PCR技术的基本操作。 使用PCR仪的安全措施 盖子 样品池及池盖内 高温、高压 运行 毛细管 电源 电源 清洁 PCR实验室里 防护服 防护手套 所有的电源 聚合酶链式反应程序 DNA 脱氧核苷酸 脱氧核苷酸 Taq聚合 94 ℃ 解旋成为单链DNA 40～60 ℃ 引物 72 ℃ 4种脱氧核苷酸 目的DNA片段的体外扩增 5 μL10×PCR dACP、dCTP、dGTP、dTTP 1 μL 5 μL 5 μL 29 μL 5 min 2 min Taq聚合酶 94 ℃ 94 ℃ 30 s 56 ℃ 30 s 72 ℃ 30 s 72 ℃ 5 min 二苯胺试剂 蓝色的深浅 1．DNA扩增的变性过程中需要DNA解旋酶的参与。 (×) 【提示】　是在94 ℃高温解链，不需DNA解旋酶的参与。 2．DNA扩增退火过程中需要DNA聚合酶参与。(×) 【提示】　只需将温度降至40～60 ℃，使引物与模板配对。 3．DNA延伸过程需要Taq聚合酶的作用。(√) 4．所有PCR中使用的引物都是相同的。(×) 【提示】　引物的序列是依据被扩增区域的3′端边界DNA序列确定的。 PCR技术的反应原理与反应过程 ①如何理解PCR技术的反应原理？ ②怎样理解PCR的反应过程？ 3．PCR扩增的计算 理论上DNA呈指数方式扩增。若开始只有一个DNA提供模板，则循环n次后有2n个；若开始有N0个DNA提供模板，则循环n次后获得的子代DNA数目为N0·2n个。 实验操作的注意事项 ①实验操作应注意哪些问题？ ②PCR扩增成功的关键是什么？ 1．PCR所用的缓冲液配制一定要严格，或者直接购买专用扩增缓冲液。 2．为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、吸液枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。 3．在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头必须更换。 4．PCR实验中应注意各种反应成分的用量，用量不当、漏加成分、PCR程序设置不当等，均有可能导致DNA片段扩增的失败。 5．PCR扩增的是位于两种引物之间的DNA片段，合理设计引物是PCR成功的关键。 1.下列关于DNA复制叙述中，正确的是 (　　)。 A．DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从5′端延伸DNA链 B．DNA复制不需要引物 C．引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合 D．DNA的合成方向总是从子链的3′端向5′端延伸 解析　本题主要考查了DNA聚合酶的作用特点。由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从引物的3′端延伸DNA链。由于模板链首先复制的是3′端，即复制方向3′→5′，而DNA分子是反向平行的，子链是依据碱基互补配对原则，在DNA聚合酶作用下合成的，其合成方向从子链5′→3′。 答案　C 2.PCR利用了DNA热变性的原理，PCR仪实际上是一种能自动调节温度的仪器。下列对PCR过程中温度的控制的说法错误的是(　　)。 A．酶促反应需要高温，是为了保证模板是单链 B．延伸的温度必须高于退火的温度，而低于变性温度 C．要用耐高温的DNA聚合酶 D．需要耐高温的解旋酶 解析　PCR是体外DNA扩增技术，DNA双链的解开不需要解旋酶，靠高温使其变性。 答案　D A．向右的过程为加热(80～100 ℃)变性的过程 B．向左的过程是DNA双链迅速制冷退火 C．变性与在生物体内解旋过程的条件、实质都相同 D．图中DNA片段共有4个游离的磷酸基、4个3′端 3.下图为DNA变性和退火示意图，下列相关说法正确的是 (　　)。 解析　变性后的DNA在缓慢降温后才会退火；变性与在生物体内解旋过程的条件不同，实质相同；任一DNA片段都有2个游离的磷酸基(5′端)和2个3′端。 答案　A 4.PCR一般要经过三十多次循环，从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链做模板时将(　　)。 A．仍与引物Ⅰ结合进行DNA子链的延伸 B．与引物Ⅱ结合进行DNA子链的延伸 C．同时与引物Ⅰ和引物Ⅱ结合进行子链延伸 D．无需与引物结合，在酶的作用下从头合成子链 解析　此题考查同学们对PCR反应中的变性、退火、延伸的实质能否真正理解。当由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链做模板时，此单链引物端为5′端，因此与它互补的子链应从另一端开始合成，即由引物Ⅱ结合延伸DNA子链。 答案　B 5.在遗