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不同处理和保存条件下体外HCV RNA稳定性研究 nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 作者：刘长利　任芙蓉　吕秋霜　刘景汉　庄辉nbsp; 【摘要】nbsp; 　　对献血者或病人进行HCV核酸检测时，如果标本的采集、处理、保存不当，会造成病毒核酸降解，从而影响检测结果的真实性。本研究的目的是对不同抗凝剂、不同温度、不同保存时间下的HCV RNA病毒稳定性进行研究，以考察常规采供血过程中，标本采集及保存方式对NAT检测的影响。 采集7例HCV RNA阳性献血者的血样，采用不同的抗凝剂、经不同的温度和不同的时间保存后，采用荧光定量PCR方法测定HCV RNA病毒含量，考察HCV RNA的稳定性。 结果表明： ①不同抗凝剂抗凝的全血于4℃保存48小时过程中, 病毒含量下降至原滴度的42.7%；EDTA抗凝组各时间点的滴度均低于其它3组（分别相当于其它3组的67.6%-25.1%）。②ACD抗凝的全血在4、25和37℃保存48小时，病毒含量分别下降到原滴度的53.8%、72.5%、29.8%。③ACD抗凝的全血离心分离出血浆，4℃或25℃继续保存7天,病毒含量分别下降至原滴度的70.9%和25.1%。④ACD抗凝的全血分离的血浆，反复冻融4次，病毒含量下降到原滴度的38.9%。 结论： ①用于核酸检测的标本应该用无菌采血管采样；②在无菌采血管采样的前提下，核酸检测标本用未抗凝血、EDTA、ACD、CPDA抗凝血均可；③采集的全血应避免放置37℃以上，ACD抗凝全血在4℃、25℃保存48小时内、37℃保存14小时内,HCV RNA病毒仍较为稳定； ④分离后的血浆应避免放置25℃以上，ACD抗凝全血分离后的血浆在4 ℃保存7天，25 ℃保存3天，HCV RNA病毒仍比较稳定；⑤血浆标本应避免多次冻融，但冻融3次的血浆HCV RNA病毒含量仍然较为稳定；⑥无菌采样对维持病毒的稳定性非常重要；单纯的机械性溶血并不会明显导致病毒的降解；只要注意无菌的问题和有合适的核酸提取方法去除血红素，HCV RNA病毒实际上比以前认为的要稳定得多。 【关键词】nbsp; 丙型肝炎病毒； 丙型肝炎病毒RNA； 病毒稳定性； 保存条件； 抗凝剂 　　Stability of Hepatitis C Virus RNA in Various Processing and Storage Conditions 　　AbstractThe study was purposed to investigate whether processing and storage conditions might influence the stabilitynbsp; of the HCV RNA in whole blood or in plasma.nbsp; The samples obtained from seven patients known to be positive for HCV RNAnbsp; were kept in different storage conditions with different anticoagulants, and at the end of processing the plasma samples were frozen atnbsp;nbsp; -80℃nbsp; until fluorescent quantitative PCR testing. The results showed that there was no significant loss of HCV RNA titers in whole blood anticoagulated with CPDA or ACD or EDTA or none（Pgt;0.05）, whilenbsp; diffe-rences in comparison ofnbsp; the EDTA-anticoagulant storage condition with three other anticoagulants storage conditions at 4℃ after 48 hours were significant （Plt;0.05）. The HCV RNA level decreased tonbsp; 53.8%,72.5% and 29.8% after 48 hours of storage of whole blood anticoagulated with ACD at 4℃, 25℃ and 37℃nbsp; respective