丙肝患者igm特异性激活补体类循环免疫合物的检测及意义.docVIP

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丙肝患者igm特异性激活补体类循环免疫合物的检测及意义

丙肝患者IgM特异性激活补体类循环免疫合物的检测及意义 nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 作者:张文军 唐 晖 贾雪芳 李红枝 【关键词】nbsp; 肝损伤   摘 要:nbsp; 目的:探讨丙肝患者体内IgM特异性激活补体类循环免疫复合物(即IgM/C3-TCIC)的变化及其意义。方法:采用捕捉nbsp; 法ILISA,对丙肝患者血清中的IgM/C3-TCIC进行检测,并将其与患者的性别、年龄、病程及谷丙转氨酶(ALT)进行统计学分析。结nbsp; 果:80例丙肝患者血清中有52例检测呈阳性,IgM/C3-TCIC的阳性率为65.0%。IgM/C3-TCIC的阳性率与ALT相关,在ALT升高组nbsp; IgM/C3-TCIC的阳性率要显著高于ALT正常组( Plt;0.05 );而与患者的病程、性别及年龄则均无明显相关( Pgt;0.05 )。结论:丙肝患nbsp; 者体内IgM/C3-TCIC可能直接参与了对肝组织损伤的过程,其病理意义值得重视。nbsp;nbsp;   关键词:nbsp; 丙肝病毒(HCV); IgM/C3-TCIC; ELISA; 肝损伤   自双特异性循环免疫复合物(Two-component-determinednbsp;nbsp; circulating immune complexes,TCIC)的概念提出以来,其病理nbsp; 生理意义的研究受到广泛重视nbsp;nbsp;nbsp; [1~3]nbsp;nbsp;nbsp; 。本研究采用捕捉法nbsp; ELISA,对丙肝患者血清中的IgM特异性激活补体类免疫复合nbsp; 物(即IgM/C3-TCIC)进行检测,旨在阐明这类双特异性循环nbsp; 免疫复合物在丙肝患者体内的变化及其临床意义,现报告如nbsp; 下。   1nbsp; 材料和方法nbsp;   1.1nbsp; 实验材料   羊抗人C3抗血清,羊抗人IgM抗血清均为上海生物制品nbsp; 研究所产品,经硫铵-DEAEnbsp;nbsp;nbsp; 32nbsp;nbsp; 层检提取IgG组分。酶 抗体为本nbsp; 室自制,采用简易过碘酸钠法 [4] 将HRP(辣根过氧化物酶,nbsp; Sigma)标记到抗人IgM的羊IgG组分上。   1.2nbsp; 实验对象   实验组包括80例丙型肝炎患者血清标本(其中男性37nbsp; 例,女性43例),对照组包括115例健康人血清标本(其中男nbsp; 性50例,女性65例)。   1.3nbsp; IgM/C3-TCIC的检测nbsp; 捕捉法ELISA的操作步骤如下:用0.1M,pH9.6的碳酸nbsp; 缓冲液将抗人C3的羊IgG稀释至7.5ug/ml,加入反应板,每nbsp; 孔0.1ml,4℃ 18~24小时,用0.01M,pH7.4 PBS-T洗涤3次,nbsp; 加入用生理盐水按1∶75稀释的血清标本,每孔0.1ml,4℃ 18nbsp; ~24小时,同上洗涤;用含2.5%兔血清的PBS-T将HRP-抗人nbsp; IgM的羊IgG作1∶1000稀释,每孔0.1ml,37℃ 1小时,同上nbsp; 洗涤;加入TMB-Hnbsp;nbsp;nbsp; 2nbsp;nbsp; Onbsp;nbsp;nbsp; 2nbsp;nbsp; 底物溶液,每孔0.1ml,37℃避光反应nbsp; 45min;2M的Hnbsp;nbsp;nbsp; 2nbsp;nbsp; SOnbsp;nbsp;nbsp; 4nbsp;nbsp; 终止反应,最后在BIO-RAD 680全自动酶nbsp; 标仪(美国产品)上测OD值。每块反应板分别以混合人血清nbsp;nbsp; 和以羊血清的作阳阴性对照。以阳、阴对照血清OD值的20nbsp; 次均值,按下面的公式对实验标本的OD值进行校正:nbsp; 被检标本OD校正值=nbsp;nbsp; 阳、阴性对照血清20次OD均值之差nbsp;nbsp; 阳、阴性对照血清实测OD均值之差 ×被检标本复孔实测ODnbsp; 均值。   2nbsp; 结果   2.1nbsp; IgM/C3-TCIC的阳性界值nbsp; 采用捕捉法ELISA检测115例健康人血清标本,由于CICnbsp; 与年龄有关nbsp;nbsp;nbsp; [1]nbsp;nbsp;nbsp; ,故以不同年龄组计算 X和SD,以X±2SD为阳nbsp; 性临界值,≥X±2SD者为升高的阳性标本,结果如表1。nbsp;nbsp;nbsp;   表1 正常人IgM/

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