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两性霉素B中的铁含量测定 nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 作者：杜晓霞 武仲涛 孟坚 宋如 张健nbsp; 【摘要】nbsp; 目的 测定两性霉素B中的铁含量。方法 两性霉素B完全灰化后灰分用稀盐酸溶解，所得溶液中的Fe(III)在酸性条件下与硫氰酸钾生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，利用比色法测定铁含量。结果 配合物在波长500nm处有最大吸收，Fe(III)浓度在0.1～2.0μg/ml范围内服从Beer定律，标准曲线回归方程为：Y=0.1766X+0.0159，相关系数r=0.9995，变异系数1.23%，回收率98%～103%。结论 本实验将药典中铁的限量检查法与比色法结合，建立了铁的定量检查法，该法操作简便、快速、准确，结果令人满意。 【关键词】nbsp; 两性霉素B； 灰化； 铁； 硫氰酸盐法； 比色法； 测定 两性霉素B是从链丝菌培养液中分离得到的多烯大环内酯类抗真菌药，为全身性深部真菌感染的首选药。两性霉素B原料药稳定性较差，研究表明铁含量高是影响其稳定性的主要因素，因此铁含量的控制是两性霉素B杂质控制的重要指标。药典中硫氰酸盐法仅可用于铁的限量检查，无法确知其含量［1］。本实验将硫氰酸盐法与比色法结合，可准确测得两性霉素B中铁的含量，本法重复性好，结果令人满意。 nbsp;nbsp;nbsp; 1nbsp; 材料与方法 nbsp;nbsp;nbsp; 1.1nbsp; 材料与仪器 nbsp;nbsp;nbsp; Fe(III)储备液(0.1mg/ml)nbsp; 准确称取0.4317g NH4Fe(SO4)2·12H2O(分析纯)置500ml容量瓶中，加水溶解后加硫酸(分析纯)2.5ml，加水至刻度，摇匀。 nbsp;nbsp;nbsp; Fe(III)标准液(20μg/ml)nbsp; 精密量取Fe(III)储备液20ml至100ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀。 nbsp;nbsp;nbsp; 硫氰酸钾(分析纯)；过硫酸钾(分析纯)；硫酸(分析纯)；硝酸(分析纯)；盐酸(分析纯)；以上所用水均为纯化水。 nbsp;nbsp;nbsp; 7230分光光度计上海精密科学仪器有限公司；AEDD微电脑红外线加热仪菏泽市电子控温技术研究所；箱式电阻炉北京太光节能技术有限公司。 nbsp;nbsp;nbsp; 1.2nbsp; 实验方法 nbsp;nbsp;nbsp; 取两只25ml容量瓶，分别加入10ml供试品溶液，依次分别加入5.0ml硫酸(1mol/L)，2.0ml过硫酸钾(5%)，其中一只加入5.0ml硫氰酸钾(4mol/L)，另一只不加作为空白，分别用纯化水定容，摇匀。用1cm比色皿在室温下与波长500nm处测定吸光度。 nbsp;nbsp;nbsp; 1.3nbsp; 样品处理 nbsp;nbsp;nbsp; 准确称取1g两性霉素B于坩埚中，先在红外线加热仪上加热炭化至无烟。移入箱式电阻炉中，于550℃灰化1h。冷却，加入2ml浓硝酸，水浴蒸干，再移入箱式电阻炉中，于550℃灰化4h［2］。冷却，加5.0ml(1+9)盐酸溶解，移入100ml容量瓶中，加纯化水至刻度，摇匀，得供试品溶液。 nbsp;nbsp;nbsp; 1.4nbsp; 标准曲线绘制 nbsp;nbsp;nbsp; 取10个100ml容量瓶，分别加入0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0、15.0、20.0和25.0ml Fe(III)标准液，加水至刻度，摇匀。对于每种浓度的溶液分别精密量取10.0ml两份，加入两只25ml容量瓶中，按实验方法进行显色操作。此溶液分别含铁0、0.08、0.16、0.24、0.32、0.40、0.80、1.20、1.60和2.00μg/ml。室温下在1cm比色皿中于500nm处测定吸光植。以吸光度为纵坐标，溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。 nbsp;nbsp;nbsp; 2nbsp; 结果与讨论 nbsp;nbsp;nbsp; 2.1nbsp; 显色原理nbsp;nbsp;nbsp; 加入过硫酸钾可将溶液中的铁全部氧化为Fe(III)，在酸性溶液中Fe(III)与硫氰酸根生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，可利用比色法测定溶液中铁离子含量［3］。 nbsp;nbsp;nbsp; 2.2nbsp; 最大吸收波长的选择 nbsp;nbsp;nbsp; 按实验方法显色