油脂2-脂肪酸的测定.docVIP

前 言 本标准等同采用国际标准ISO 6800：1997《动植物油脂 甘三酯分子2-脂肪酸组分的测定 》（英文版）。 本标准的内容和结构与ISO 6800：1997一致，作了如下编辑性修改： ──“本国际标准”一词改为“本标准”； ──用小数点“．”代替作为小数点的逗号“，”； ──删除国际标准的前言。 本标准的附录A为规范性附录。 本标准的附录B、附录C为资料性附录。 本标准由国家粮食局提出。 本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。 本标准由国家粮食局科学研究院负责起草。 本标准起草人：栾霞、王瑛瑶、张蕊、薛雅琳。 本标准为首次制定的国家标准。 动植物油脂 甘三酯分子2-脂肪酸组分的测定 1 范围 本标准规定了用于动植物油脂甘三酯分子2-脂肪酸（β或内位）组分的测定。 由于胰脂酶的活性，这个方法只适用于熔点在45℃以下的油脂。 这个方法不适合含有下列物质的油脂： ——含有十二或更少碳原子（如：椰子油、棕榈仁油、黄油）的脂肪酸； ——含有二十碳或更多碳原子（鱼油和海生动物油）的高度不饱和脂肪酸（多于四个双键）； ——含有氧化次基团。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 5524 植物油脂检验 扦样、分样法 GB/T 5530 动植物油脂 酸价和酸度测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 15687 油脂试样制备 GB/T 17376 动植物油脂 脂肪酸甲酯制备 GB/T 17377 动植物油脂 脂肪酸甲酯的气相色谱分析 3 原理 在中和游离脂肪酸后，用柱色谱净化试样。甘三酯被酶部分水解生成2-单甘酯。用薄层色谱（TLC）分离单甘酯，并用气相色谱分析脂肪酸组分。 4 试剂 所有试剂均为分析级。 4.1 用于试样净化的试剂 4.1.1 2-丙醇，95%（V/V），或乙醇，95%（V/V）。 4.1.2 正己烷或石油醚，沸点范围：30℃至60℃。 4.1.3 2-丙醇，50%（V/V），或乙醇，50%（V/V）。 4.1.4 氢氧化钠，0.5mol/L溶液。 4.1.5 酚酞溶液，每100mL95%(V/V)乙醇溶液加入1g酚酞。 4.1.6 中性活化氧化铝，用于柱色谱。 4.1.7 氮气。 4.2 用于甘三酯水解的试剂 4.2.1 乙醚。 4.2.2 盐酸，6mol/L。 4.2.3 胆烷酸钠，1g/L溶液，提高酶催化质量。 4.2.4 氯化钙，220g/L水溶液。 4.2.5 缓冲溶液，1mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液。用盐酸调节pH值到8，并用pH计测量。该溶液在0℃～4℃条件下贮存，并在14天内使用。 4.2.6 胰脂肪酶，活度范围在8～20单位/mg。储存在冰箱里。使用前，由于周围温度带有粉末。 4.3 用于分离2-单甘酯的试剂 4.3.1 乙醇，95%（V/V）。 4.3.2 正己烷或石油醚，沸点范围：30℃ ～60℃。 4.3.3 丙酮。 4.3.4 硅胶土，带包装，用于薄层色谱。 4.3.5 展开剂，其中：正己烷或石油醚，70mL；乙醚，30mL；甲酸，98%（V/V），1mL。 4.3.6 2’，7’-二氯萤光黄溶液，显示剂，2g/L乙醇溶液。该溶液每100mL加入1滴1mol/L氢氧化钠溶液，使呈微碱性。 4.4 用气相色谱分析2-单甘酯的试剂 参见GB/T 17377 动植物油脂 脂肪酸甲酯的气相色谱分析和GB/T 17376 动植物油脂 脂肪酸甲酯制备。 5 仪器 常规和专用仪器如下： 5.1 用于净化样品的仪器 5.1.1 水浴锅，能恒温控制，并保持温度在30℃ ～40℃之间。 5.1.2 色谱柱，用于色谱分离，内径13mm，长400mm，配有一熔结玻璃圆盘和一个塞子。 5.1.3 旋转蒸发器，带有250mL圆底烧瓶。 5.1.4 试管，用于充入氮气。 5.1.5 分液漏斗，规格500mL。 5.1.6 圆底烧瓶，规格100mL。 5.2 用于甘三酯水解的仪器 5.2.1 离心机。 5.2.2 离心管，玻璃，规格10mL，带有磨口玻璃塞。 5.2.3 电动振荡器，能使离心管激烈摇动。 5.2.4 水浴锅，能恒温控制，并保持温度在40℃±0.5℃。 5.2.5 注射器，规格1mL，带有细针。 5.2.6 秒表。 用于分离2-单甘酯的仪器 展开箱，用于薄层色谱，带有磨砂玻璃盖，适