胺基酸的比色定量.ppt

胺基酸之比色定量 化學乙級技術士訓練教材(1) 內容大綱 （一）實驗目的 學習定量試樣中的胺基酸。 學習分光光度計的比色方法。 學習化學分析技術的操作與安全要領。 （二）完成時間 （三）操作說明 二氫茚三酮(Ninhydrin)與胺基酸反應時產生有色物質利用此物質含量與胺基酸濃度成正比的關係比色定量試樣中的胺基酸含量。 二、相關知識 (一) 呈色反應 (二) 比色定量 (三) 建立檢量線 (四) 未知試樣中胺基酸之定量 1.精秤-1 1.精秤-2 1.精秤-3 2.配成100mL-1 2.配成100mL-2 2.配成100mL-3 1.稀釋-1 1.稀釋-2 1.稀釋-3 1.稀釋-4 四、實驗步驟-2 五、 實驗報告-1 六、評分標準 以刻度吸量管吸取3.6mL冰醋酸加入燒杯中 以量筒量取50mL去離子水加入燒杯中 2.配製緩衝溶液-3 (一)甘胺酸儲備溶液之配製 (二)甘胺酸標準溶液之配製 (三)檢量溶液之配製 (四)檢量曲線之製作 (五)未知試樣之定量 1.取7根試管分別編號1至7 。 取甘胺酸標準液0.2，0.3，0.5，0.7，0.8及1.0mL，分別加入1至6號之試管內，第7號試管作為空白試驗。 (三) 檢量溶液之配製 1.精取標準溶液-1 取7支試管，編號 ， 取一燒杯以標準液潤洗 1.精取標準溶液-2 捨棄潤洗液 取1mL刻度吸量管以標準液潤洗 1.精取標準溶液-3 吸取0.2mL標準液加入第一支試管 2.取適當體積之去離子水，加入各試管內，使其總體積為1mL。 2.調整體積為1mL-1 2.調整體積為1mL 2.調整體積為1mL-2 以刻度吸量管吸入去離子水 使試管內溶液的總體積為1mL 3.取0.5mL之醋酸緩衝液及0.5mL之二氫茚三酮試劑於各試管中充分混合後蓋上小玻璃珠。 3.加呈色劑-1 3.加呈色劑-2 3.加呈色劑-2 3.加呈色劑-2 倒緩衝溶液入燒杯中 以0.5mL球形吸量管吸取緩衝溶液 3.加呈色劑-3 加緩衝溶液入每一支試管內 以0.5mL球形吸量管吸取呈色劑 3.加呈色劑-4 加呈色劑入每支 試管內 每支試管蓋上玻璃珠 3.加呈色劑-5 小心搖均勻 4.將各試管置於試管架內，並放入沸水浴中，加熱至沸騰，並繼續維持15分鐘。 4.煮沸-1 恆溫水槽 4.煮沸-2 將試管置入恆溫槽中加熱 煮沸15分鐘 5.取出試管置於冷水浴中冷卻後，加入10mL的50%酒精，充分混合。 5.加入酒精-1 冷水浴中冷卻 5.加入酒精-2 以10mL球形吸量管吸取酒精 加入每支試管中 5.加入酒精-3 以玻棒攪動使混合均勻 靜置30分鐘 (一)甘胺酸儲備溶液之配製 (二)甘胺酸標準溶液之配製 (三)檢量溶液之配製 (四)檢量曲線之製作 (五)未知試樣之定量 四、實驗步驟-3 1.於570nm波長測定各溶液之吸收度。 (四)檢量曲線之製作 打開電源，預熱30分鐘 將濾光鏡選擇桿調到正確位置 儀器歸零 1.測吸收度-1 調整波長選擇鈕至570nm 打開比色槽蓋子，取出比色管，蓋上蓋子 轉動歸零鈕使透光率為0.0 570 0.0 TRANSMITTANCE 取一支乾淨的比色管，加入去離子水 調靈敏度 以拭鏡紙將比色管表面拭淨 將比色管置入比色槽內，注意刻度線對齊 轉動靈敏度鈕至透光率為100% 另取一支乾淨的比色管，加入第一瓶檢量溶液，潤洗比色管 潤洗液倒入廢液杯 測吸收度 將比色管置入比色槽內 加入檢量溶液至上方記號處 以拭鏡紙將比色管擦拭乾淨 * * 術科測驗第一題第二站 臺北市立松山工農化工科 謝榮忠製作 實驗步驟(-3) 實驗報告 評分標準 實驗步驟(-2) 試題簡介 相關知識 實驗器材與藥品 實驗步驟(-1) （一）實驗目的 （二）完成時間 （三）操作說明 一、試題簡介 三小時三十分 在醋酸-醋酸鈉的緩衝溶液存在下，甘胺酸的酒精溶液與二氫茚三酮(Ninhydrin)可生成紫色的化合物。 (一)呈色反應 以純的甘胺酸配製標準溶液。 以分光光度計測量呈色後的標準溶液在波長570nm的吸收度。 (二)比色定量-1 3.比耳定律 (1)透光率(Transmittance)T＝ (I/Io)×100% (2)吸收度(Absorbance) A＝－log(I/Io) (3)比耳定律：一定波長的光通過發色物質時，吸收度與濃度及光徑長度成正比。 Io I 光徑(b) A＝abc a：吸光係數 b：光徑 c：濃度 (二)比色定量-2 以吸收度為橫座標，甘胺酸含量(μg)為縱座標，於方格紙上作圖。 利用電子計算機的線性迴歸功能計算檢量線的截距(A)與斜率(B)。 (三)建立檢量線-1 3.檢量線方程式 甘胺酸含量(μg) = 截距(A) + 斜率(B) ×吸收度 (三)建立檢量線-2 取甘