果蝇唾腺染色体的标本制备和观实验报告..doc

果蝇唾腺染色体的标本 制备和观察实验报告 实验时间：2011.3.8 【摘要】 果蝇唾腺染色体在进行染色体畸变分析及对染色体的原位杂交和基因定位等研究方面具有很强的优越性。本次实验使用果蝇三龄幼虫，取其唾液腺染色体制片观察，获得延展良好的染色体切片，目的是掌握果蝇三龄幼虫唾腺的剖离方法及标本的制备方法，了解果蝇唾腺染色体的形态结构。 【引言】 多线染色体比较大，识别标记比较多是遗传学研究染色体的好材料。早在1881年Balbiani在摇蚊幼虫唾腺发现了多线染色体，人们将之命名为“spireme”。Heitz和Bauser的实验证实了spireme的本质是DNA。Painter等意识到这正是研究遗传学的理想染色体，发现了基因在染色体上的定位，及特定唾腺染色体臂的表示方法等。研究发现多线染色体广泛存在于双翅目、弹尾目昆虫的消化道及消化腺中。这种巨大染色体的形成机制在于，果蝇幼虫的唾腺细胞发育到一定阶段后，停止在间期，但紧密配对的同源染色体仍能不断复制，复制后的子染色体彼此不分开，复制可达9次之多，因此一对染色体最终可产生 2*29 =1024条染色质丝，它们集结在一起形成了一条多线染色体。[1]由于染色质丝的不同部位螺旋化程度不同而形成了横纹结构，成为了进行基因定位的坐标。多线染色体上基因转录活跃的部位DNA会解螺旋而形成涨泡，是多线染色体的又一标志。本实验中对剥离的唾腺染色体解离、染色、压片而制备临时标本，从而观察果蝇唾腺染色体的结构。 【实验用品】 果蝇三龄幼虫，生理盐水，蒸馏水，HCl溶液，改良苯酚品红染液，吸水纸，解剖针，载破片，盖玻片，滴管，解剖镜，显微镜等 【实验方法】 1.剥离唾腺 在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫置于载玻片上。每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。左手持解剖针按压住虫体前端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺，腺体随之而出。[2] 果蝇幼虫唾腺显微镜下可明显看到半透明细胞，其上的黑色脂肪也可作为辨别标志。 2.解离 去掉多余组织，将唾腺置于载玻片。在唾腺组织上滴一滴1NHCl，解离1-2min ，以松软组织，利于染色体的分散。[3] 3.染色 滤纸吸去?HCl，滴加少许蒸馏水，浸泡2min后用滤纸吸去，重复2-3次后滴加改良苯酚品红染液染色10min。 4.压片 大约在染色进行到5min时，盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。将玻片放于实验台上，用解剖针柄垂直地、螺旋形由中间向四周轻轻敲击盖玻片，使细胞分散染色体平展。再用两层滤纸覆盖在盖玻片上，两拇指垂直用力按压（不能让盖玻片滑动）。[4] 5.镜检 先用100X观察，找到分散好的染色体再转用高倍镜进行观察。 【实验结果】 图1 果蝇幼虫唾腺染色体(1) 图2 果蝇幼虫唾腺染色体(2) 【分析讨论】 1.本次实验最大的问题在于如何使染色体臂很好地分散开来。这是染色体制片的关键问题。可以用解剖针柄垂直地、螺旋形由中间向四周轻轻敲击盖玻片，使细胞分散染色体平展，再用两层滤纸覆盖在盖玻片上，两拇指垂直用力按压；或者用大拇指用力压住，并横向揉几次；也可在盖玻片一角插入薄刀片，再行按压等。但是实验过程中我感觉到这些方法仍有些随机性，还是不能很好的展开染色体。如图2，染色体基本没有展开，应该是敲击盖玻片时操作过轻。 2.解剖过程中要注意使果蝇浸没在水中，防止灯散发的热量将其烤干。但水不宜过多。 3.染色时间不宜过长，且压片前要小心吸去多余染料，防止压片时染液溢出，唾腺易随染色液漂走，且使观察时背景干净便于观察。 4.用滤纸吸溶液时要小心不要把唾腺吸走。可将玻片稍倾斜，液体顺着玻片往下流，在距唾腺一定距离的下游小心将液体吸走。[5] 5.本次实验最好使用果蝇三龄幼虫，选择试管中比较大，活动较少且头部无触角状部分出现。 【参考文献】 [1]杨大祥.遗传学实验.科学出版社.2010.60-61 [2]果蝇唾腺染色体的标本制备和观察ppt.24 [3]果蝇唾腺染色体的标本制备和观察ppt.24 [4]杨大祥.遗传学实验.科学出版社.2010.65 [5]杨大祥.遗传学实验.科学出版社.2010.65