蛋白质分析和蛋白质组学0__培训课件.ppt

从四个视角看蛋白质 蛋白质的细胞定位 从四个视角看蛋白质 蛋白质的功能 蛋白质组学 四种进行高通量分析的手段 二维凝胶电泳 亲和层析串联质谱 酵母双杂交系统 基于基因组DNA序列分析 （Rosetta stone） 四种进行高通量分析的手段 二维凝胶电泳 二维：根据分子大小与迁移率的反比关系，将混合液中各个组分分开 一维：等电聚焦使蛋白质根据电荷初步分离。 蛋白质是两性离子 被分离成分用来直接测序 Fig. 1.?Real gels of protein extracts obtained using the TCA–acetone (A), phenol (B), and TCA–acetone–phenol (C), and a master one (D) are presented. Proteins (100?μg loaded) were separated over pH range 5–8 (17?cm strips) and 12% SDS-polyacrylamide gel. The gel was stained with Sypro Ruby. Numbered spots corresponded to those showing qualitative or statistically significant quantitative differences.  四种进行高通量分析的手段 亲和层析串联质谱 确定酵母细胞中存在蛋白复合物的方法 Bait蛋白 导入酵母细胞 电泳纯化蛋白复合物 切割含有蛋白质条带的凝胶 质谱分析，确定蛋白质序列 四种进行高通量分析的手段 酵母双杂交系统 检测蛋白质-蛋白质相互作用的方法 Fields and Song， 1989 Fig. 1: Principle of the Two-hybrid system. (A), (B) Two chimeras, one containing the DNA-binding domain (DB: blue circle) and one that contains an activation domain(AD: half blue circle), are co-transfected into an appropriate host strain. (C) If the fusion partners (yellow and red) interact, the DB and AD are brought into proximity and canactivate transcription of reporter genes (here LacZ). X Y 以酵母双杂交法寻找与EBV编码的LMP1 C-末端结合的 蛋白质 Cell, Vol. 80, 389-399, February 10, 1995, Copyright ? 1995 by Cell Press 四种进行高通量分析的手段 基于基因组DNA序列分析（Rosetta stone） 分析细胞通路的生物信息学方法 蛋白质网络图 通路 相互联系在一起的生化反应的集合 展望 The End * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 蛋白质分析和蛋白质组学 基础学院 病理生理学教研室 引言 从四个视角看蛋白质 蛋白质组学 分析细胞通路的生物信息学方法 Protein analysis and proteomics Individual proteins Perspective 1: Protein families (domains and motifs) Perspective 2: Physical properties (3D structure) Perspective 3: Localization Perspective 4: Function protein Page 389 RNA DNA protein [1] Protein families [4] Protein function [2] Physical properties Page 389 [3] Protein localization Gene ontology (GO): --cellular component --biological process --molecular function 从四个视角看蛋白质 蛋白质家族 蛋白质的物理性质 蛋白质的细胞定位 蛋白质的功能 Perspective 1: Protein domains and mot