抗原抗体反应及应用__培训课件.pptVIP

二、免疫标记 免疫标记技术：将已知抗体或抗原标记上易显示的物质（示踪物），通过检测标记物反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。 目前有四种方法： 放射免疫分析法：以同位素为示踪物，为最灵敏、可靠的免疫标记技术。 酶联免疫吸附试验（ELISA） 荧光与发光免疫分析 亲和标记的免疫分析 标记免疫技术= 抗原抗体反应 示踪物标记 灵敏性 特异性 标记免疫技术的主要特点： 高特异性、高灵敏性 免疫技术+标记技术 酶联免疫吸附试验（ELISA） ( enzyme linked immunosorbent assay) (1) 定义：抗原与抗体吸附在固相表面，如聚苯乙烯微量板，抗原与抗体反应后，将固相与液相分离除去游离的抗原或抗体，而结合的抗原或抗体上被标记的酶仍保持活性，催化底物形成有色产物。 (2) 测试方法：可目测或用分光光度计比色进行定性或定量检测。 (3) 原理（以间接性ELISA为例）： 首先以已知抗原包被酶标板，吸附一定时间后，洗涤未结合的可溶性抗原成分 在吸附有抗原的酶标板中，加入待测血清，孵育一定时间，使待测血清中的特异性抗体与包被抗原充分反应、结合，之后充分洗涤未与抗原结合的游离抗体成分。 显色 在吸附有抗原抗体复合物的酶标板中，加入针对待测抗体来源种属的酶标二抗。酶标二抗吸附一定时间后，充分洗涤，去除未结合成分。 加入标记酶的相应底物，孵育一定时间后显色(底物被酶催化变为有色产物)。产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析 三、免疫定位分析 1. 免疫荧光定位分析 2. 酶标记免疫定位 3. 免疫电子显微镜技术 四、抗原抗体反应的其他应用 免疫亲和层析 原理：任何一对抗原-抗体的组分之一与固相基质交联后均可用于另一组分的纯化。广泛用于蛋白质抗原的分离纯化。 固相基质：琼脂糖、葡聚糖 2.生物感应器与抗体芯片 机理：抗原与抗体在相互结合后，它们的结构发生了变化，一些次级键参与结构的变化。这种结构的改变通过电场效应的改变可以被检测到。 可以判断抗原抗体的结合是否发生及发生的强度。 * * * * * * * * 酶联免疫吸附试验属于免疫酶技术的一种 根据标记对象和检测对象的不同，可以分为多种类型，以其中一种来介绍这种方法的基本原理i： 首先以已知抗原包被酶标板，吸附一定时间后，洗涤未结合的可溶性抗原成分。 在吸附有抗原的酶标板中，加入待测血清，孵育一定时间，使待测血清中的特异性抗体与包被抗原充分反应、结合，之后充分洗涤未与抗原结合的游离抗体成分。 在吸附有抗原抗体复合物的酶标板中，加入针对待测抗体来源种属的酶标二抗（即若待测血清来自人，那么应加入抗人的二抗。免疫球蛋白的免疫原性可以分为同种型、同种异型和独特型，其中同种型抗原决定簇存在于CH和CL区，因此，以某一种属的IgG免疫另一种属，可以获得针对该种属所有IgG的特异性结合的抗体，由于是针对抗体的抗体，将其称之为二抗。在这个试验当中，正是利用二抗的这一特点，用于最后的酶反应显色，因为这样就可以同一种属的同一类抗体制备一个酶标二抗，这一二抗可以用于来自该种属所有同类抗体的检测。 酶标二抗吸附一定时间后，充分洗涤，去除未结合成分。 加入标记酶的相应底物，孵育一定时间后显色。 * 酶联免疫吸附试验属于免疫酶技术的一种 根据标记对象和检测对象的不同，可以分为多种类型，以其中一种来介绍这种方法的基本原理i： 首先以已知抗原包被酶标板，吸附一定时间后，洗涤未结合的可溶性抗原成分。 在吸附有抗原的酶标板中，加入待测血清，孵育一定时间，使待测血清中的特异性抗体与包被抗原充分反应、结合，之后充分洗涤未与抗原结合的游离抗体成分。 在吸附有抗原抗体复合物的酶标板中，加入针对待测抗体来源种属的酶标二抗（即若待测血清来自人，那么应加入抗人的二抗。免疫球蛋白的免疫原性可以分为同种型、同种异型和独特型，其中同种型抗原决定簇存在于CH和CL区，因此，以某一种属的IgG免疫另一种属，可以获得针对该种属所有IgG的特异性结合的抗体，由于是针对抗体的抗体，将其称之为二抗。在这个试验当中，正是利用二抗的这一特点，用于最后的酶反应显色，因为这样就可以同一种属的同一类抗体制备一个酶标二抗，这一二抗可以用于来自该种属所有同类抗体的检测。 酶标二抗吸附一定时间后，充分洗涤，去除未结合成分。 加入标记酶的相应底物，孵育一定时间后显色。 第七章 抗原抗体反应及应用 第1节 抗体的制备与应用 抗血清：指抗原人工免疫实验动物，获得含特异性抗体的血清。 多克隆抗体(PAb)：多个抗原决定簇免疫机体所产生的多种抗体的混合物。 单克隆抗体（monoclonal antibody，MAb）：由单一B细胞克隆合成并分泌的一种组