酶工程学-第11、12周分子修饰要点.ppt

酶工程学 Enzyme Engineering 学习内容 绪论(第一章) 二、常用的修饰剂 右旋糖酐、聚乙二醇、肝素、蔗糖聚合物、聚氨基酸等 三、修饰方法 四、大分子化学修饰的优点 1.通过修饰提高酶的活性 2.通过修饰增强酶的稳定性 3.通过修饰降低或消除酶的抗原性 右旋糖酐 肝素 聚蔗糖 聚赖氨酸 聚乙二醇 修饰酶 核糖核酸酶 Vs 右旋糖酐修饰核糖核酸酶 1 ： 2.25 胰凝乳蛋白酶 Vs 右旋糖酐修饰胰凝乳蛋白酶 1 ： 5.1 酶的半衰期t1/2：酶的活力降低到原来活力一半时所经过的时间。 很多修饰剂分子具有多个活性基团，常与酶形成多点交联，使酶的空间结构稳定，特别是使酶活性中心的构象得到保护。 举例：超氧化物岐化酶（SOD） O2- + O2- + 2H+ =H2O 2 +O2 SOD作用：保护DNA，蛋白质和细胞膜 SOD药用：类风湿性关节炎，白内障，膀胱炎，皮肤炎，红斑狼疮等。 SOD静脉注射：t1/2=6~30min 右旋糖酐-SOD：t1/2=7h 聚乙二醇-SOD：t1/2=35h 当外源蛋白非经口进入人或动物体内后，体内血清中就可能出现与此外源蛋白特异性结合的物质，这些物质称为抗体，能引起体内产生抗体的物质称为抗原。 大分子化学修饰是降低甚至消除酶抗原性的有效方法之一 * 第六章 酶工程学 第十一周 第一章 酶工程学 酶的生产 酶的改性 酶的应用 酶生物合成的基本理论(第二章) 酶的生物合成法(第三章) 酶的提取与分离纯化(第四章) 酶改性的基本理论(第五章) 酶分子修饰(第六章) 酶固定化(第七章) 酶应用的基本理论(第八章) 酶反应器的应用(第九章) 酶的应用领域(第十章) 第六章 酶分子修饰 ——通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰。 酶分子侧链基团的化学修饰：使酶分子的侧链基团发生改变，从而改变酶分子的特性和功能的修饰方法。 定义： 酰化试剂 可被修饰的氨基酸残基侧链 例如： 丹磺酰氯，二甲氨基萘磺酰氯，DNS 烷基化试剂 可被修饰的氨基酸残基侧链 R ——X： 2，4——二硝基氟苯，DNFB 多肽序列分析法：Sanger N-端序列分析法，1945年 Na2S4O6：连四硫酸钠 四硝基甲烷 二硫二硝基苯甲酸 4，4’－二硫二吡啶 对氯汞苯甲酸 2－氯汞－4－硝基苯酚 N-乙基马来酰亚胺 过氧化氢氧化 氨基的化学修饰 乙酸酐 2’4’6－三硝基苯酚 2’4－二硝基氟苯 碘代乙酸 还原烷基化 丹磺酰氯 碳二亚胺 硼氟化三甲锌盐 酯化 焦炭酸二乙酯 碘乙酸 碘化反应 胍基的化学修饰 丁二酮 1’2－环己二酮 苯乙二醛 RNA DNA 2’－OH脱氧 腺苷酸 脱氧腺苷酸 *