07 实验七 微生物生理生化反应观察精品课件.ppt

实验七 微生物生理生化反应观察p.220-225) 一.实验目的 初步了解微生物生化鉴定与分类的原理与方法；掌握淀粉水解试验、明胶水解试验、尿素水解试验（脲酶试验）、糖发酵试验的原理和方法。 二. 原理： 1.某些细菌能够分泌一种胞外酶,即淀粉酶。它可将淀粉水解为小分子的糊精、麦芽糖和葡萄糖，再被细菌吸收利用。 淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能产淀粉酶的微生物在含淀粉培养基上培养后，由于淀粉被细菌的淀粉酶水解，遇碘不在变蓝色，培养基上菌体周围会出现无色透明圈。据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。 2.明胶是由胶原蛋白水解产生的蛋白质，在25℃以下可维持凝胶状态，以固体形式存在，而在25℃以上明胶会液化。如果接种的微生物能够产生明胶酶，它可将明胶水解成小分子物质，破坏其交替状态，使明胶生化管在25 ℃以下发生液化，据此性质可以鉴别产明胶酶的微生物。 3. 许多细菌含有脲酶，尿素酶能将培养基中尿素分解成氨、二氧化碳和水，产生的氨累积在培养基中，使加有酚红酸碱指示剂的营养琼脂由中性变成碱性，从而产生颜色变化（由黄色变成深粉红色）。通过生化管的颜色变化就可以判断接种的培养基是否产生尿素酶。(注:在空气中放置一段时间后上部变红,原因空气氧化) 4、有些微生物能够分解葡萄糖或乳糖产生有机酸（乳酸、醋酸、丙酸）使生化管的pH值降低，从而使含酸碱指示剂溴甲酚紫（pH5黄－pH7紫）的营养琼脂由紫色变成黄色，通过生化管的颜色变化可以判断是否能产生相应的糖水解酶类。 三、实验步骤 1.淀粉水解实验：每2人接种二支淀粉生化管（分别接种大肠杆菌和枯草芽孢杆菌），37℃培养2d，加卢革氏碘液少量观察和记录每管颜色变化，得出结论。 枯草芽孢杆菌是阳性对照菌。 2.明胶水解实验：每2人接种二支明胶生化管（分别接种大肠杆菌和金黄色葡萄球菌），37℃培养2天，从37℃取出即观察和记录各管的明胶水解情况，得出结论。 大肠杆菌是阳性对照菌。 3.尿素水解实验：每2人接种两支尿素生化管（分别接种变形杆菌和金黄色葡萄球菌），37℃培养2天，观察和记录每管培养前后颜色变化，得出结论。 变形杆菌是阳性对照菌。 4、葡萄糖发酵试验：每2人接种二支葡萄糖生化管（一支接种大肠杆菌、一支接种变形杆菌），37℃培养2天，观察和记录每管培养前后颜色变化，得出结论。 大肠杆菌和变形杆菌均是阳性。 5、乳糖发酵试验：每2人接种二支乳糖生化管（一支接种大肠杆菌、一支接种变形杆菌），37℃培养2天，观察和记录每管培养前后颜色变化，得出结论。 大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气； 普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，但不能分解乳糖。 四、实验注意事项 淀粉水解实验，在观察时需要加卢革氏碘液以便观察淀粉的水解情况； 接种均在无菌条件下操作； 生化管用砂轮切割玻璃后接种。 实验报告要求 写出生理生化试验测定结果，并对你的实验现象进行分析。 * *