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1、相似的形态染色—从形态上无法区别 中等大小的G-杆菌 多有鞭毛、菌毛 肠道杆菌的生物学性状 2、活泼的生化反应 肠道杆菌的生物学性状 乳糖发酵试验 初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌 肠道致病菌 肠道非致病菌 多数不发酵乳糖 多数发酵乳糖 肠道杆菌的生物学性状 -/+ - + 伤寒杆菌 - - + 痢疾杆菌 - ⊕ ⊕ 大肠杆菌 硫化氢 乳糖 葡萄糖 菌名 将粪便标本以分区划线法接种到SS培养基。 (每个实验室8个平板） (接种好后，做好标记，用胶布按班绑好) 放入37℃温箱中培养24小时。取出放4℃冰 箱中保存备用。 分离培养方法 三、消毒灭菌（2学时） 1. 细菌在自然界的分布及理化因素 对细菌的影响 2. 高压蒸汽灭菌法 空气中细菌的检查（每个班1个平皿） 原理：根据空气中携带有微生物气溶胶（以固体或液体微小颗粒分散于空气中的分散体系称为气溶胶，其中的气体是分散介质）粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上。 方法：在室内选择一处放一个平皿。揭开皿盖，皿盖扣置于皿底下，暴露放置15min，即盖上皿盖，放入37 ℃ 培养24小时，观察结果。 1.1 细菌在自然界的分布 1.2.1紫外线对细菌的影响（每个实验室1个培养皿） 原理：紫外线主要作用于DNA，使一条DNA链上的两个相邻胸腺嘧啶以共价键结合成二聚体，从而干扰DNA的复制与转录导致细菌变异或死亡。对病毒也有破坏作用。 紫外线杀菌作用强，而穿透能力弱。普通玻璃、纸张、水蒸气、尘埃等均能阻挡。 紫外线中波长为240-300nm者具有杀菌能力，其中265-266nm的杀菌作用最强。 常用于消毒物体表面，手术室无菌实验室，传染病房的空气消毒及不耐热物品消毒。 1.2理化因素对细菌的影响 紫外线对细菌的影响 取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培养皿中，然后按图所示揭开平皿盖，置于紫外线下照射30分钟，然后盖好盖子，置37℃培养24h后取出观察结果。 1 促进菌体蛋白质变性或凝固。 2 干扰细菌酶系统和代谢。 3 损伤细菌的细胞膜，影响细菌的化学组成，物理 结构和生理活动，从而发挥防腐、消毒至灭菌作用。 1.2.2化学消毒剂对细菌的影响 有些化学药品浓度高时能杀灭病原微生物， 称为化学消毒剂； 浓度低时能抑制细菌生长，称为防腐剂； （只能外用，对细菌的敏感性不同） 化学消毒剂对细菌的影响 化学消毒剂分类 1 高效消毒剂：杀灭细菌芽孢在内的所有微生物，适用于不 耐热力灭菌但要进入人体内部的物品，如内 窥镜等。 次氯酸钠、过氧化氢、甲醛、环氧乙烷等 2 中效消毒剂：不能杀灭芽孢，但能杀灭繁殖体（包括结核 杆菌），真菌和大多病毒，如喉镜，麻醉器材 碘酊、乙醇等 3 低效消毒剂：能杀灭大多细菌繁殖体，但不能杀灭芽孢， 结核杆菌及某些抵抗力强的真菌和病毒。 新洁尔灭、洗必泰、高锰酸钾等 影响消毒灭菌的因素 1 微生物的种类 2 微生物的污染程度 3 环境中的有机物 4 消毒剂的性质、浓度与作用时间 5 温度、湿度、酸碱度 6 化学拮抗物 化学消毒剂对细菌的影响 方法：取一普通平皿培养基， 一部分写上“前”，另一部分 写上“后”，然后将手指在写 有“前”的部分沾一下，再将 手指用酒精进行消毒，在写 有“后”的部分沾一下。放入 37℃温箱培养24小时后观察。 （每个实验室2个平皿） 方法：用“打咳法”进行检查。 取一个血琼脂平皿培养基（咽喉部多为葡萄球菌），打开平皿盖，对着平皿咳嗽几次（口腔前约10厘米），然后放入37℃温箱培养24小时后观察菌落数量及特征。 咽喉部细菌的检查 2 高压蒸气灭菌法 原理：蒸汽被限制在密闭容器内，随着热力的作用压力不断升高，蒸汽的温度也相应升高，在103.4kPa蒸汽压力下时，温度可达121.3℃。维持15~20分钟后可杀死细菌包括芽孢在内的所有微生物。 高压蒸气灭菌器 1)构造 高压蒸气灭菌器是一个双层的金属圆筒，两层之间盛水，外层坚厚，其上或前方有金属厚盖。盖旁附有螺旋，借以紧闭盖门，使蒸气不能外溢。 高压蒸气灭菌器上装有排气阀、安全阀，以调节器内压力，装有的温