海藻酸钙固定化葡萄糖淀粉酶的研究毕业设计.doc

摘 要 本次研究采用的是海藻酸钠为载体，利用包埋法固定葡萄糖淀粉酶。研究得出了制备时的给酶量、氯化钙浓度、形成时间对固定化酶的影响，在此基础上，也进一步研究了固定化酶的米氏常数和重复使用稳定性。 在单因素实验基础上，通过三因素三水平正交试验得出，氯化钙浓度为2%，形成时间为3.5h，给酶量为22mg是最佳组合，单位质量的酶活力为12151U/g。游离酶的Km为2.50mg/ml，固定化酶的Km为3.63mg/ml。通过固定化之后，酶对底物的亲和力降低了。随着使用次数的增加，酶活性逐渐降低，但是每次反应10min，在使用10次之后，酶活性还有原来的50%。the glucamylase was immobilized using the method of embedding . In this experiment, we know the influence of the amount of enzyme, concentration of calcium chloride and curing time on immobilized enzyme. On this basis, we make further study on Michaelis constant and the stability of repeated use of the immobilized enzyme. On the basis of single factor experiment, we do the three factors and three levels orthogonal test. When the concentration of calcium chloride is 2%, the curing time is 3.5h and the amount of enzyme is 22mg, we can get the best combination, unit mass of enzyme activity is 12151 u/g. The Km of free enzyme is 2.50 mg/ml, the Km of immobilized enzyme is 3.63 mg/ml. After the immobilization, enzyme reduces the affinity to the substrate. With the increase of use, enzyme activity decreases gradually. Immobilized enzyme retained 50% activity after 10 reuses with 10 min of each reaction time. Keywords: calcium alginate; glucamylase; immobilized enzyme 目 录 摘 要 I Abstract II 1 绪论 1 1.1葡萄糖淀粉酶的简介 1 1.1.1葡萄糖淀粉酶的性质 1 1.1.2葡萄糖淀粉酶与淀粉的反应 1 1.1.3葡萄糖淀粉酶与α-淀粉酶 1 1.2酶固定化的方法 1 1.2.1吸附法 1 1.2.2包埋法 2 1.2.3交联法 2 1.2.4结合法 2 1.3 载体材料的介绍 2 1.3.1海藻酸钠的性质 2 1.3.2海藻酸钠与氯化钙的反应 2 1.4 总体操作流程 3 1.5 研究目的和意义 3 2 海藻酸固定化葡萄糖淀粉酶的方法 5 2.1材料 5 2.1.1实验材料和试剂 5 2.1.2仪器与设备 5 2.2测定方法 6 2.2.1斐林试剂的标定 6 2.2.2游离酶活力的测定 6 2.2.3固定化酶活力的测定 7 2.3试验方法 7 2.3.1固定化酶的制备 7 2.3.2海藻酸包埋法固定化葡萄糖淀粉酶的 7 2.3.3正交试验 8 2.4结果与讨论 8 2.4.1固定化酶 8 2.4.2给酶量的确定 9 2.4.3 CaCl2浓度的确定 10 2.4.4形成时间的确定 11 2.4.5正交试验 12 2.5小结 14 3 海藻酸固定化葡萄糖淀粉酶特性的研究 15 3.1材料和方法 15 3.1.1实验材料和试剂 15 3.1.2仪器与设备 15 3.2测定方法 15 3.2.1酶活力的测定 15 3.2.2葡萄糖标准曲线的制备 15 3.3试验方法 16 3.3.1葡萄糖淀粉酶米氏常数的测定 16 3.3.2重复使用稳定性的测定 18 3.4小结 20 4结论与展望 21 4.1结论 21 4.2展望 21 致 谢 22 参考文献 23