细菌的血清学及分子生物学检测幻灯片.ppt

细菌感染的非培养检测方法 华中科技大学同济医院检验科 主要方法 免疫学检测 分子生物学检测 细菌毒素检测 动物实验 免疫学检测 Ag+Ab AgAb 用已知抗体或抗原来检测未知抗原抗体 抗体检测 已知抗体检测未知抗原：效价（或滴度）的升高 诊断血清 多价血清 单价血清 因子血清 抗原检测 凝集试验 玻片凝集试验 乳胶凝集试验 反向间接凝集试验 SPA协同凝集试验 免疫荧光技术 ELISA 细菌毒素的检测 内毒素的检测：G-细菌感染 外毒素的检测：待检菌的鉴定，并区分产毒株与非产毒株 动物实验 分离和鉴定病原微生物 测定细菌的毒力 制备免疫血清 建立致病动物模型 取动物的血清配制培养基 用于生物制品或一些药物的安全、毒性、疗效检验 细菌感染的分子生物学检测 细菌感染的分子生物学检测 核酸杂交 聚合酶链反应（PCR） 生物芯片技术 核酸杂交 核酸探针：带有标记物的、能与特定核酸序列发生特异性互补的已知序列核酸片段。 核酸杂交方法： 1.斑点杂交 2.菌落原位杂交 3.Southern印迹 4.Northern印迹 核酸杂交在临床微生物检测中的应用 细菌分类鉴定 细菌快速鉴定 细菌耐药性的检测 细菌毒素的检测 细菌流行病学调查 聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR） PCR扩增产物的分析 凝胶电泳分析法 斑点杂交法 酶谱分析法 序列分析法 PCR在临床微生物检验中的应用 细菌的快速检测 细菌毒素的检测 细菌的耐药性的检测 细菌流行病学调查 基因芯片技术 基因芯片应用存在的问题 蛋白质芯片技术 分子诊断的质量控制 标准化操作程序（SOP) 标准化实验室 室内质控和室间质评 传统方法目前不可替代 快速简便的分子诊断技术越来越普及 Jan Weile Cornelius Knabbe；Current applications and future trends of molecular diagnostics in clinical bacteriology；Anal Bioanal Chem (2009) 394:731–742 本章要求掌握的内容 细菌感染的病原学诊断方法有哪些？ 细菌形态学检查包括：不染色标本检查法和染色标本检查法 细菌染色常用染料：碱性染料、酸性染料、复合染料 常用染色方法：革兰染色、抗酸染色和荧光染色 本章要求掌握的内容 常用培养基的种类：基础、营养、鉴别、选择、特殊 糖类发酵试验原理：具发酵不同糖的酶。 氧化-发酵试验的原理：分解葡萄糖需不需氧 分子生物学方法检测细菌的优缺点 * * 含A蛋白 的金葡菌 IgG类抗体 结合IgG的金葡菌 抗 原 凝集 协同凝集试验 分子诊断极大的节约时间 针对传染病的分子诊断技术被国际权威的《自然》、《科学》杂志列为改善发展中国家人民健康的十大生物技术之首！ 最早的生物芯片 概念源于计算机芯片 基本原理：微阵列技术，核苷酸固定到固体支持物上，将处理好的样品与其进行杂交，以实现对所测样品基因的大规模检验。 特点：高通量、高集成、微型化、平行化、多样化和自动化 1998年度世界10大科技进展之一 发展迅速，应用日益广泛 不同实验室结果的比较 芯片价格，实验成本 微阵列质量控制MAQC 蛋白质芯片的强势挑战 自身存在的技术缺陷 双向凝胶电泳(2-DE)和质谱(MS)分析鉴定技术为蛋白质组学研究的两大核心技术 蛋白质芯片是指以蛋白质分子作为配基,将其固定在固相载体的表面,形成的蛋白质微阵列 分类：生物化学型芯片、化学型芯片和缩微芯片 蛋白质芯片技术是继基因芯片之后，被称为横扫生物科学和医学界的一次“迷你”革命 The FDA is Coming! 方法原理、实验步骤、使用指征、报告格式，结果、标本、临床有效性等因素 *