蛋白质性质及纸色谱.docVIP

蛋白质的性质 一、实验目的 了解蛋白质的基本结构和重要的化学性质 二、仪器与试剂 试剂：蛋白质溶液、硫酸铜、硫酸铜%甘氨酸、%脯氨酸、%苏氨酸饱和硫酸铵、5%碱性醋酸铅、0.1%茚三酮、浓硝酸、红色石蕊试纸 仪器：常用仪器、水浴锅 三、实验内容与步骤 . 蛋白质与重金属盐作用 取2支试管，各加入蛋白质溶液1，再在其中一支试管中加入5%碱式醋酸铅溶液滴，另一支试管中加入硫酸酮溶液滴，立即产生沉淀(切勿加过量试剂，否则，沉淀又复溶解)。 蛋白质的可逆沉淀，取支试管，加入蛋白质溶液，再在其中加入溶液，再用水稀释，观察沉淀是否溶解 2. 蛋白质茚三酮试验 取支试管，分别加蛋白质溶液%甘氨酸溶液再分别加入3滴0.1%茚三酮溶液，混合后，放在沸水浴中加热1-5分钟，观察并比较的显色时间及颜色情况。 2）黄蛋白试验 取一支试管，加入蛋白质溶液及 浓硝酸，出现白色沉淀或浑浊，然后加热煮沸，观察现象，反应液冷却后再滴入%氢氧化钠溶液至反应液呈碱性，观察颜色变化。 3） 二缩脲试验 取支试管，蛋白质溶液再加入滴%氢氧化钠溶液，混合后，再加入1-2滴硫酸酮溶液(勿过量)振荡后，观察现象。 3. 蛋白质的碱解 取1mL蛋白质溶液放在试管里，加入2mL%NaOH溶液，把混合物煮沸2-3分钟，此时析出沉淀，继续沸腾时，沉淀又溶解，放出氨气 (可用红色石蕊试纸放在试管口检出之)。 向试管中加入lmL 1O%铅溶液，加入%NaOH溶液，1mL蛋白质溶液 氨基酸的纸色谱 一、实验目的 1、 ? 2、掌握纸层析法分离氨基酸的原理和步骤。 二、实验原理 纸层析法是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法是用滤纸为支持物进行层析的方法，所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，水是固定相，有机溶剂是流动相。溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。将样品点在滤纸上(原点)，进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。溶质在滤纸上的移动速率用Rf值表示： 在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。只要条件(如温度、展层溶剂的组成)不变，Rf值是常数，故可根据Rf值作定性判断。 氨基酸无色，可利用茚三酮显色反应，将氨基酸层析点显色作定性、定量用。 三、药品器材 1实验器材 滤纸、烧杯、剪刀、毛细血管、电吹风、铅笔、直尺等 2溶剂系统 展开剂、显色剂、混合氨基酸溶液、各种氨基酸溶液 四、实验方法 1. 滤纸准备：滤纸，裁成24cm×28cm的长方形，在距纸一端2cm处用铅 笔轻轻划一基线，在线上每隔3cm，画一小点样的原点。 2. 点样：用毛细管吸取少量氨基酸样品点于原点，用吹风机稍加吹干。 3. 展层：将点好样的滤纸，原点在下端，浸立在展开缸内，起始线不要浸没在液面以下，层析纸不要触及烧杯壁，当溶剂展层至距滤纸上沿1-2cm时，停止，自然晾干。 4. 显色：展层毕，取出滤纸，用热风吹干，将茚三酮溶液均匀喷在层析纸上，在烘箱中烘干，蓝紫色斑点即显现。 5. 结果：用铅笔轻轻描出显色斑点的形状，并用一直尺度量每一显色斑点中心与原点之 间的距离和原点到溶剂前沿的距离，计算各色斑的 Rf 值。 蛋白质溶液硫酸酮溶液 蛋白质溶液碱式醋酸铅溶液 现象： 蛋白质溶液硫酸溶溶液 现象： 现象： 苏氨酸溶液茚三酮 甘氨酸溶液茚三酮 溶液茚三酮 蛋白质溶液 茚三酮 现象： 现象： 现象： 现象： 冷却，加氢氧化钠 蛋白质溶液 现象： 现象： 现象： 蛋白质溶液氢氧化钠溶液硫酸酮溶液 蛋白质溶液氢氧化钠 出现沉淀，再煮沸 现象： 加入浓盐酸 现象