RNA提取及PCR相关技术__培训课件.pptVIP

RT-PCR 逆转录步骤 二、PCR扩增（示例） cDNA第一链 2 ul 10×PCR buffer(K+) 5 ul 25mM MgCl2 3 ul (1.5 mM) 10mM dNTPs 1 ul (各200 uM) 50μM引物 正向/ 反向 各0.5 ul (0.1~0.5 uM) Taq 酶 0.5 ul (1~5U) 双蒸水 38.5 ul 总反应体积： 50 ul PCR mix包含：buffer（Mg2+） dNTPs Taq酶 RT-PCR 逆转录步骤 PCR反应条件 95 ℃ 2 min 95 ℃ 30 sec 40-65 ℃ 10-120 sec 22-35cycle 72 ℃ 60-120 sec 72 ℃ 10min 12 ℃ ∞ 退火温度：引物的退火温度一般要比估计的相应熔点温度