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五、连锁分析的方法 基因连锁分析的主要方法： (一)、两点测验(two-point testcross) 通过三次测验，获得三对基因两两间交换值、估计其遗传距离；每次测验两对基因间交换值；根据三个遗传距离推断三对基因间的排列次序。 (二)、三点测验(three-point testcross) 一次测验就考虑三对基因的差异，从而通过一次测验获得三对基因间的距离并确定其排列次序。 （一）两点测验：步骤(1/3) 1. 通过三次亲本间两两杂交，杂种F1与双隐性亲本测交，考察测交子代的类型与比例。 例：玉米第9染色体上三对基因间连锁分析： 子粒颜色： 有色(C)对无色(c)为显性； 饱满程度： 饱满(SH)对凹陷(sh)为显性； 淀粉粒： 非糯性(Wx)对糯性(wx)为显性. (1).(CCShSh×ccshsh)→F1×ccshsh (2).(wxwxShSh×WxWxshsh) → F1×wxwxshsh (3).(wxwxCC×WxWxcc) → F1×wxwxcc 两点测验的3个测交结果 2. 计算三对基因两两间的交换值估计基因间的遗传距离。 3. 根据基因间的遗传距离确定基因间的排列次序并作连锁遗传图谱。 C-Sh: 3.6 Wx-Sh: 20 Wx-C: 22 两点测验：局限性 1. 工作量大，需要作三次杂交，三次测交； 2. 不能排除双交换的影响，准确性不够高。 当两基因位点间超过五个遗传单位时，两点测验的准确性就不够高。 黑腹果蝇品系：野生型果蝇（+++）长翅、直刚毛、红眼。三隐性果蝇（m sn3 w）小翅、焦刚毛、白眼。 （二）三点测验与基因直线排列 计算基因间的重组值：??????????????? m—w间的重组值 w—sn3间的重组值 m—sn3间的重组值 m—w间重组值小于m—sn3间和sn3－w间重组值之和，这是什么原因？ 画遗传学图： m-w间重组值小于m-sn3与w-sn3间重组值之和，这是因为两个相距较远的基因发生了双交换的结果。而这种发生了双交换的果蝇在基因顺序尚未揭晓时，也就是说，当遗传学图还没有画出时，是难以确定的。 遗传学图画出以后，可以分析出m-w间发生双交换能产生两种表型的果蝇：m+w（小翅、直刚毛、白眼）和+sn3+（长翅、卷刚毛、红眼）。这两种果蝇计有八只，在计算m-w间重组值时，这个值没有被计算进去。二个相距较远的基因的重组值被低估了。 低估的值是：8/1000×100％=0.8％ 因为是双交换，所以再乘以2，得0.8％×2=1.6％。这就是校正值。画出图距。???????? 黑腹果蝇遗传基因位点间关系 红眼V、翅无横脉Cv和截翅Ct三个基因为例，杂交及结果如下。 三点测交的结果 表型 实得数 比例 (%) 重组发生位点 V-CV CV-CT V-CT V + + 580 80.9 　 　 　 + Cv Ct 592 V Cv + 45 5.9 √ √ 　 + + Ct 40 V Cv Ct 89 12.6 √ 　 √ + + + 94 V + Ct 3 0.6 　 √ √ + Cv + 5 合计 1448 100 18.5 6.5 13.2 ?V－Ct（13.2 ）和Ct－Cv（6.5 ）之和19.7，大于V－Cv的距离（18.5），是什么缘故呢？ 双交换被漏掉 交换率为0.6 %×2＝1.2%， 如果把漏掉的双交换值加进去则（V－Cv）＝（Cv－Ct）＋（V－Cv） 18.5 ＋1.2 ＝6.5＋13.2＝19.7 绘出V、Cv、Ct的遗传图 仍以玉米C/c、Sh/sh、Wx/wx三对基因连锁分析为例: 1. 用三对性状差异的两个纯系作亲本进行杂交、测交： P: 凹陷、非糯性、有色 × 饱满、糯性、无色 sh + +/sh + + + wx c/ + wx c F1及测交: 饱满、非糯性、有色×凹陷、糯性、无色 sh + +/+ wx c sh wx c/sh wx c 2. 考察测交后代的表现型、进行分类统计。 在不完全连锁的情况下测交后代有多少种表现型？ 3. 按各类表现型的个体数，对测交后代进行分组； 4. 进一步确定两种亲本类型和两种双交换类型； 测交后代的表现型 F1 配子种类 粒数 交换类别 饱满、糯性、无色 + wx c 2708 凹陷、非糯、有色 sh + + 2538 饱满、非糯、无色 + + c 626 凹陷、糯性、有色 sh wx + 601 凹陷、非糯、无色 s