生化问题讨论要点.pptxVIP

Ⅰ测定牛奶中蛋白质含量的方法有哪些？试比较其优缺点。 甲醛值滴定法 凯 氏 定 氮 法 蛋白质测定的国标规定方法——凯氏定氮法 蛋白质是含 氮 的有机化合物。牛奶与 硫酸 和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使 氨 游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。 含氮有机物与浓硫酸共热 凯氏定氮仪反应室：过量的浓氢氧化钠，将NH4+转变成NH3 消化作用 NH3驱入过量的 硼酸溶液接受瓶 标准盐酸滴定 四硼酸铵 蒸馏 为了加速和完全有机物质的分解，缩短消化时间，在消化时通常加入硫酸钾、硫酸铜、过氧化氢等试剂，加入硫酸钾可以提高消化液的沸点而加快有机物分解，硫酸铜起催化剂的作用。使用时常加入少量过氧化氢作为氧化剂以加速有机物氧化。 优点 缺点 2008年中国奶制品污染事件是中国的一起食品安全事件。事件起因是很多食用三鹿集团生产的奶粉的婴儿被发现患有肾结石，随后在其奶粉中被发现化工原料三聚氰胺。随后国家质检总局对国内的乳制品厂家生产的婴幼儿奶粉进行了三聚氰胺检验，包括伊利、蒙牛、光明、圣元及雅士利在内的多个厂家的奶粉都检出三聚氰胺。 三聚氰胺进入人体后，发生取代反应(水解)，生成三聚氰酸，三聚氰酸和三聚氰胺形成大的网状结构，造成结石。 三聚氰胺事件 微波消解—凯式定氮法 此法事实上是针对凯氏定氮法一些缺点的一种改进，结合高压消解和微波快速加热两方面的性能，提高消解样品能力，减少溶剂用量，并且由于样品采用密闭消解，有效地减少了易挥发元素的损失。 但该测定方法与传统的凯式定氮法无显著性差异，并不能解决凯氏定氮法无法区别无机氮和有机氮的缺点。 甲醛值滴定法 牛奶中蛋白质含量与游离氨基酸含量呈良好的正相关。氨基酸为两性电解质,在接近中性的水溶液中,全部解离为双极离子。当甲醛溶液加入后,与中性的游离氨基酸中非解离型氨基反应,生成单羟甲基和二羟甲基诱导体,使氨基酸失去氨基特性,游离的羧基(-COOH)可以用标准碱溶液滴定,根据碱溶液的消耗量得出游离氨基酸含量,乘以经验常数计算出蛋白质的含量。 并且本方法准确、简便、快速并有效地解决了非蛋白质类的含氮物质对牛奶与奶制品中蛋白质测定结果的干扰问题。 近红外光谱技术 　 传统的牛奶成分含量的测量大都基于分析化学方法, 分析过程破坏样品、费时费力, 并且是离线测量。 近红外(NIR)光谱技术利用近红外(NIR)漫反射光谱(780～2526nm)快速测量牛奶中脂肪、蛋白质和乳糖的含量。近红外光谱主要是由于分子振动的非谐振性使分子振动从基态向高能级跃迁时产生的。一般有机物在该区域的近红外光谱吸收主要是含氢基团的倍频和合频吸收, 几乎所有有机物的主要结构和组成都可以在它们的近红外光谱中找到信号, 且谱图稳定。物质的含量与近红外区内多个不同的波长点吸收峰呈线性关系, 因此开始利用该技术来测定一些产品中的物质含量。由于牛奶含有这些含氢基团, 因此可以将近红外技术应用于牛奶的检测。 近红外光谱技术的应用具有着以下优点: (1)分析速度快, 测量过程大多可在1min内完成; (2)分析效率高, 通过一次光谱测量和已建立的相应校正模型, 可进行无限多样品多组分的连续测定; (3)适用样品范围广, 通过相应的测样附件可以直接测量液体、固体、半固体和胶体等不同物态的样品； (4)样品一般不需预处理, 不需使用化学试剂或高温、高压、大电流等测试条件,一般可以达到无损测定; (5)分析成本较低, 节省费用, 且不污染环境; (6)近红外光在普通光纤中具有良好的传输特性,便于实现在线分析; (7)操作简单方便, 使用安全, 对操作人员要求不很高, 且无身体损害。 Bradford法采用考马斯亮兰G250（CBBG）作为测定蛋白质的试剂。在酸性介质中，CBBG分子的光吸收最大波长为465 nm，当CBBG与蛋白质中的Arg，His，Lys，Tyr，Trp和Phe等残基结合时，其最大吸收发生红移至595 nm而转变为蓝色。595 nm处的吸光度与溶液中的蛋白质含量成正比。三聚氰胺等含氮小分子化合物和毛发水解物与CBBG的相互作用较弱，不能改变CBBG的光谱特性。 Bradford 法 优点 缺点 请结合实例介绍酵母双杂交技术的原理及应用。 请结合实例介绍酵母双杂交技术的原理及应用。 酵母双杂交体系简称双杂交体系，是１９８９年由Ｆｉｅｌｄｓ和Ｓｏｎｇ提出并初步建立的。这一系统是一种灵敏的真核细胞内鉴定基因的方法，可有效地用来分离能与一种已知的靶蛋白相互作用的蛋白质的编码基因。此技术以其简便、灵敏、高效以及