构建方法的异同对肾阳虚大鼠模型的影响差异.docVIP

构建方法的异同对肾阳虚大鼠模型的影响差异 　　肾阳虚大鼠模型是研究中医阴阳学说和补阳药物作用机制的重要手段，它需要符合中医“肾阳虚”典型症状，如精神萎顿、体毛干枯不齐、反映迟钝等。历来建模方法各式各样，然缺乏比较分析，不同建模方法对大鼠的病理生化产生不同的影响，如腺嘌呤构建的肾阳虚模型同时也会影响生育，适合研究不育症。因此，不同建模方法对于中药药效评价和机制研究也不同。探索简便有效的肾阳虚大鼠建模方法，明确其病理生化变化，对药效学研究及机制探讨具有重要作用。本文报道腺嘌呤和氢化可的松构建的肾阳虚大鼠模型肾脏睾丸及SU、Cr、SOD、MDA的变化，供研究参考。 　　1　材料和方法 　　1.1材料 　　1.1.1实验动物　SPF级雄性SD大鼠21只，体重180～200g，来源：广州中医药大学实验动物中心，许可证号SCXK(粤)2013-0020。 　　1.1.2主要试剂及仪器　未提纯的腺嘌呤Ameresco(生产批号，广州华奇盛生物科技有限公司，氢化可的松(100mg/20mL，生产批号：1106021)，天津金耀氨基酸有限公司。总超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(WST-1法，货号：A001-1，生产批号：201412)、丙二醛(MDA)测定试剂盒(TBA法，货号：A003-1，生产批号：201412)、RatAdrenocorticotropicHormone(ACTH)Elisa测定试剂盒(生产批号：201412)，南京建成生物工程研究所。BX-51型病理图像采集系统(日本奥林巴斯公司)。LabsystemsFinnpipette100mu;L单道移液器;Thermo50mu;L8道移液器;HH-4数显恒温水浴锅(国华电器有限公司);华东电子DG5033A酶标仪(南京华东电子集团医疗装备有限责任公司)。 　　1.2　实验方法 　　1.2.1　分组与造模　按随机数字表法把动物分为3组：空白组(7只)大鼠按2mL/只皮下注射生理盐水，连续10d。腺嘌呤组大鼠(7只)皮下注射未提纯腺嘌呤，剂量0.2g/(kg·d)，连续10d。氢化可的松组大鼠(7只)大腿内侧肌肉丰厚处注射氢化可的松25mg/(kg·d)，连续13d。 　　1.2.2　一般情况　观测大鼠的活动度、对外界反应的灵敏度、皮毛光泽、饮食、饮水、死亡情况。 　　1.2.3　大鼠自主活动度　实验结束后，将大鼠投入干净饲养盒中，适应3min后，计算各鼠2min内的自由活动时间。 　　1.2.4 大鼠游泳时间　自主活动度测量结束后，将大鼠放入盛满常温水的水箱中，测量大鼠放入到开始下沉的时间为游泳时间。 　　1.2.5 标本的采集与制备　经过12h后，摘眼球取血，血液常温放置1h后4℃离心机3000r/min10min离心，取血清。大鼠颈椎脱臼处死，取肾脏睾丸观察并称重，把肾脏睾丸用10%甲醛溶液固定并放至-20℃冰箱保存，常规石蜡包埋，切片，HE染色，光学显微镜下进行组织病理学检查。 　　1.2.6　指标测定　血清尿素采用脲酶-波氏比色法，血清肌酐采用苦味酸速率法，均通过测定吸光光度值计算。血清SOD水平采用TBA法，通过测定OD值计算;血清MDA水平采用WST-1法，通过测定吸光光度值计算。 　　1.3　统计学方法 　　数据用均数plusmn;标准差(珋xplusmn;s)表示，符合正态分布及方差齐性用方差分析，组间比较采用SNK-q检验，方差不齐采用DunnettT3检验，Plt;005为有显著性差异。 　　2　结果 　　2.1　各组大鼠表现 　　空白组大鼠无疲倦，活动正常，饮食量逐渐增加，体重增加。腺嘌呤组大鼠疲倦，饮食量减少，体重减轻，体毛稀疏无光泽，有集群现象。氢化可的松组大鼠饮食量减少，体重减轻，注射部位出现大片脱毛，无光泽，甚至脱皮后结痂，有集群现象。 　　2.2　各组大鼠肾脏睾丸HE染色结果空白组大鼠肾脏睾丸表面色泽鲜红，肾皮质与肾髓质结构清晰、分界清晰，生精小管排列紧密，间质细胞丰富，生精小管内的生精细胞排列规则，层次清晰，精子数目多。腺嘌呤组肾脏表面色泽鲜红，体积略增大，肾皮质略微固缩，肾小管管腔变窄，肾间质水肿、充血伴明显的炎性细胞浸润;睾丸生精小管萎缩变性，排列疏松，间质退化、细胞减少，各级生精细胞排列松散，不规则，精子数量较少。氢化可的松组肾脏表面色泽鲜红，肾皮质固缩不明显，与肾髓质分界清晰，肾间质有炎性细胞浸润;睾丸生精小管略萎缩，排列疏松，各级生精细胞排列松散，不规则。 　　2.3　大鼠脏器指数、自主活动度和游泳时间与空白组比较，腺嘌呤、氢化可的松组大鼠肾脏和睾丸指数均增大(