研究丹参素对H2O2 诱导的血管内皮细胞氧化损伤保护程度.docVIP

研究丹参素对H2O2 诱导的血管内皮细胞氧化损伤保护程度 　　1　资料和方法 　　体外利用1mmol/LH2O2 诱导HUVEC 细胞损伤，在加入H2O2 之前分别加入不同浓度15、30、60mg/L 的丹参素中继续培养24h，MTT 法测定丹参素细胞毒性作用和细胞活力，比色法检测丹参素对H2O2 处理的HUVEC 细胞中超氧化物歧化酶(SOD) 活性，丙二醛(MDA) 含量的影响，ELISA 法检测一氧化氮(NO) 含量的变化，western blot 分析各组细胞内内皮型一氧化氮合成酶(eNOS) 的表达。 　　2　统计学分析 　　应用Statuiew(SASInc) 统计软件，以平均值plusmn; 标准差来表示，对所得数据进行t 检验，Plt;0.05 为有统计学意义。 　　3　结果 　　3.1　丹参素对HUVEC 细胞毒性作用MTT 结果显示，对照组平均OD 值为0.712，除了5mg/L组的平均OD 为0.698，略低于对照组外，但无统计学意义，其余各浓度组OD 值均高于对照组，表明丹参素在1~90mg/L区间对HUVEC 的活性无明显影响，没有明显细胞毒性作用。 　　3.2　丹参素对H2O2 处理的HUVEC 细胞活性影响H2O2 处理HUVEC 细胞24 小时后，细胞活性明显下降，OD 值由正常的0.712plusmn;0.065 下降到0.324plusmn;0.048，两者有显著性差异(Plt;0.01)，细胞相对抑制率高达54%，30min 前预先加入最终浓度15mg/L, 30mg/L 和60mg/L 能明显提高OD值和内皮细胞的活性，在15~60mg /L 浓度之间呈浓度依赖性提高HUVEC 细胞活性，降低H2O2 对HUVEC 细胞的抑制作用。中和高浓度药物组与模型组比较有显著性差异(Plt;0.05，Plt;0.01)。 　　3.3　丹参素对H2O2 处理的HUVEC 细胞中MDA 和SOD的影响H2O2 处理HUVEC 细胞24 小时后，细胞中MDA 含量明显升高( 由1.106plusmn;0.131mu;mol/L 升高到2.327plusmn;0.497mu;mol/L) 而SOD 含量明显降低( 由18.782plusmn;2.101 IU/mL 升高到7.079plusmn;1.646IU/mL)，与对照比较有显著性差异(Plt;0.01，Plt;0.01)，30min 前预先加入15mg/L，30mg/L 和60mg/L 丹参素呈浓度依赖性降低细胞中MDA 的含量和提高SOD 含量。中和高浓度丹参素组与模型组比较均有显著性差异(Plt;0.01、Plt;0.01，Plt;0.01、Plt;0.01)。 　　4　讨论 　　心血管疾病(CVD) 现在已经成为威胁人类健康的主要杀手，已经引起学者的广泛关注。血管内皮可以通过不同动脉之间的连接将人体各个系统联系在一起，直接或间接参与人体各项功能。血管内皮功能障碍被认为是CVD 病理过程的第一步，成为CVD 的风险因素，促进CVD 的进展。 　　HUVEC 细胞是被公认的并广泛应用一种血管内皮细胞株，本实验选择HUVEC 细胞，首先观察丹参素对HUVEC有无毒性作用，MTT 结果显示，在1~90mg/L 浓度范围内，丹参素对HUVEC 的吸光度无明显影响，暗示丹参素在此浓度范围内对HUVEC 无毒性作用，同时我们选择的药物浓度15,30,60mg/L 均在次浓度范围内，保证用药安全。 　　导致血管内皮功能障碍的因素很多, 其中氧化应激这一因素在心血管疾病的发病机制中起着重要的作用，其可通过多种机制导致内皮功能受损。氧化应激状态下ROS 的产生超过机体抗氧化系统，ROS 由包括NADPH 氧化酶，黄嘌呤氧化酶，细胞色素P450 等组成的氧化酶系统产生，同时被SOD，过氧化氢酶，谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶系统清除，生成超过清除速率时活性氧自由基，活性氮自由基和脂质自由基堆积，机体处于氧化应激状态。 　　本实验利用H2O2 引起HUVEC 氧化应激损害，结果发现H2O2 能明显提高HUVEC 的MDA 水平和降低SOD 活性，导致内皮细胞处于氧化应激状态，同时H2O2 能明显降低HUVEC 活力。H2O2 作用前30min 给予丹参素(15,30,60mg/L) 预处理，结果发现丹参素呈剂量依赖性降低HUVEC 的MDA 水平和降低SOD 活性，明显提高HUVEC 活力，丹参素(30,60mg/L) 与模型组比较，有明显的统计学意义(Plt;0.05)。暗示丹参素可以提高HUVEC 的抗氧化能力。 C 　　综上所述，本研究提示体外培养