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谈中药遗传毒性研究思路和方法 　　20 世纪上半叶，随着化学工业的急剧发展，由于环境污染和农药、医药或食品添加剂等的广泛使用而造成的遗传性损害越来越多地被人们认识。50 年代以后，DNA 结构、复制、修复及其调控蛋白质合成的机制被逐渐认识和阐明，以此为理论基础相继建立了一些基于不同生物种系的检测化学物质遗传毒性的试验方法，这些方法在70 年代以后得到迅速发展。药物遗传毒性，是指药物诱发的遗传物质在染色体水平、分子水平和碱基水平上的各种损伤而造成的毒性作用，主要包括药物致染色体畸变、药物致DNA 损伤和药物致基因突变3 类。虽然绝大多数中药在使用上相对安全，但是由于其遗传毒性研究基础不足，对不少中药遗传毒性的认识还相当肤浅。 　　1 中药的遗传毒性研究 　　我国中药的遗传毒性研究起步较晚，在20 世纪70 年代以后逐步得到重视。1985 年开始实施的《新药审批办法》中规定了对新药的特殊毒理学研究要求。但与其他国家的要求相比较，我国对中药的特殊毒理学评价要求相对较低。按照2007 版中药新药注册要求，中药注册分类中一类、二类和四类药要求必须报送遗传毒性试验资料及文献资料; 三类药中除具有法定标准的中药材、天然药物外，必须报送遗传毒性试验资料及文献资料。如果处方中含有无法定标准的药材，或来源于无法定标准药材的有效部位，以及用于育龄人群并可能对生殖系统产生影响的新药( 如避孕药、性激素、治疗性功能障碍药、促精子生成药、保胎药或有细胞毒作用等的新药) ，应报送遗传毒性试验资料及文献资料。近年来研究人员对中药单体、单味药及复方进行了一系列遗传毒性研究。目前已有实验证实生川乌、盐附子、浮海石、人参浸膏、赤苷脉通注射液、喜炎平注射液、玉屏风胶囊、复方藿莲香Ⅰ号无遗传毒性。甘草、枸杞、丹参、黄芪、北豆根多糖未见遗传毒性且具有一定的抗突变作用。苍术苷有间接致突变活性; 汉防己甲素具有潜在的遗传毒性，可导致DNA 链发生断裂; 槟榔碱可导致仓鼠卵巢细胞微核明显增多，细胞周期延长; 板蓝根和连翘对细胞有一定的致突变作用，可诱导蚕豆根尖细胞产生游离染色体、染色体断片、染色体粘连、染色体桥等多种类型的染色体畸变; 大黄、槐米和红花提取物对人血淋巴细胞具有致突变作用，并能抑制人淋巴细胞的生长和分裂增殖; 九节菖蒲有致突变效应的倾向，其致突变性呈剂量相关性; 雄黄具有遗传毒性，能致体内外细胞染色体畸变，其致突变性呈剂量相关性; 朱砂体内短期大剂量给药或长期小剂量给药可引起染色体损伤; 单味马兜铃有致突变性，能诱导大范围DNA 损伤，诱导tk 基因突变并产生突变集落，而复方龙胆泻肝丸有明显的减毒效果; 菟丝子水提液大剂量有潜在遗传毒性，可诱发孕鼠及胚胎微核率增加; 吴茱萸醇提取物无遗传毒性，但吴茱萸次碱和柠檬苦素有致突变性，可使细胞染色体畸变率增加; 细辛水煎液能明显诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核和小鼠精子畸形，具有致突变作用。 　　2 遗传毒性评价方法 　　遗传毒性生物检测系统包括微生物、昆虫、哺乳动物( 细胞和整体动物) 、植物等多种，目前发展较为成熟的遗传毒性评价方法主要有以遗传基因突变为指标的试验( 细菌回复突变试验、小鼠淋巴瘤tk 试验) 、以染色体畸变为指标的试验( 微核试验、染色体畸变试验) 和以DNA 损伤为指标的试验( 单细胞凝胶电泳检测) 3 种。细菌回复突变试验( Ames试验) 是根据致突变物能使组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌突变株回复成野生型的特点，利用不同组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌突变株检测受试物作用后细菌回复突变率的变化，从而判断受试物是否具有致突变性。小鼠淋巴瘤tk 试验( mouse lymphoma assay，MLA) 是根据细胞tk 基因发生突变后产生对三氟胸苷的抗药性，细胞在普通培养基和三氟胸苷培养基中均可存活，而tk 基因正常的细胞在三氟胸苷培养基中死亡的特点，判断受试物是否具有致突变性。微核试验( micronucleus test，MNT) 是根据细胞受到染色体断裂剂或纺锤体毒物作用时，受损的染色体断片滞留在细胞质中或主核未能形成而形成微核的特点，判断受试物是否引起染色体畸变。染色体畸变试验( chromosomal analysis，CA) 是根据受试物作用后染色体断裂、数目和形态结构异常等变化，判断受试物是否引起染色体畸变，其包括体内试验和体外试验，前者可采用啮齿动物骨髓细胞、生殖细胞等进行分析，后者多采用哺乳动物细胞系。单细胞凝胶电泳检测( single cell electrophoresisassay，SCGE) ，又称彗星试验( comet assay) 是将受试物作用后的细胞包埋在琼脂糖凝胶中，经裂解与解旋后损伤的DNA 碎片带负电荷向阳极迁移形成拖尾，通过对尾部的测量，推测DNA 损