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谈正交试验法优选黄马酊最佳渗漉工艺 　　黄马酊是重庆市中医院使用多年的临床验方，具有疏通经络、活血止痛、解毒消肿、消瘀散结之功效，临床主要外用于血管栓塞性脉管炎( 中医脱疽) ，有独特疗效。黄马酊由酒黄连和制马钱子2 味中药材组方，其中黄连主要指标成分为盐酸小檗碱，马钱子主要指标成分为士的宁，均为生物碱类，其醇溶性较水溶性好，因此提取溶剂选用一定浓度的乙醇。常用的乙醇提取方法有浸渍法、渗漉法、回流法等，渗漉法有操作简便、效率高等优点，适于医院制剂室生产。为了保证制剂的质量和疗效，本研究中以盐酸小檗碱及士的宁的含量为评价指标，采用正交试验方法，对乙醇最佳渗漉工艺进行了考察。现报道如下。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　安捷伦1260 型高效液相色谱仪( 安捷伦公司) ;ODS - 3 C18 柱( 北京迪马欧泰科技发展中心) ; DAD 紫外检测器; 自制渗漉装置; 分析电子天秤( 瑞士MettlerToledo 仪器公司) ; Milli - Q Biocel A - 10 超纯水制备系统( 美国Millipore 公司)。 　　1.2 试药 　　黄连对照药材( 批号为913 - 8902) ，马钱子对照药材( 批号为121164 - 200302) ，士的宁对照品( 批号为110705 - 200306，供含量测定用，含量以97% 计) ，盐酸小檗碱对照品( 批号为110713 - 200609，供含量测定用，含量以98. 5% 计) ，以上试药均由中国药品生物制品检定所提供; 水为超纯水，甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 含量测定 　　2. 1. 1 色谱条件 　　色谱柱: ODS - 3 C18 柱(250mm times; 4. 6mm，5 mu;m); 流动相: 甲醇- 乙腈- 0. 1 mol /L 磷酸二氢钠及0. 025 mol /L十二烷基硫酸钠溶液( 50 ∶ 25 ∶ 25) ; 检测波长: 254 nm;柱温: 30 ℃; 流速: 1. 0 mL /min。理论板数以士的宁峰计应不低于5 000。 　　2. 1. 2 溶液制备 　　称取士的宁和盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL 含士的宁0. 046 mg 及盐酸小檗碱0. 097 mg 的对照品混合溶液，即得对照品溶液。取处方比例的黄连粗粉、马钱子粗粉，加相应浓度的乙醇润湿，置渗滤桶中，浸渍48 h，调节流速，加乙醇至处方量，收集渗滤液，静置，滤过，精密量取1 mL 滤液，置100 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0. 22 mu;m 微孔滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得供试品溶液。取缺黄连阴性样品、缺马钱子阴性样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。 　　2. 1. 3 方法学考察 　　系统适用性试验: 在拟订色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 mu;L 注入液相色谱仪，测定。各峰之间分离度均大于1. 5。色谱。标准曲线绘制: 称取士的宁对照品14 mg，盐酸小檗碱对照品24 mg，精密称定，分别置50 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，再分别精密量取上述2 种对照品溶液1. 0，2. 0，3. 0，4. 0，5. 0，6. 0 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。精密吸取上述系列对照品溶液各20 mu;L，注入液相色谱仪，测定士的宁及盐酸小檗碱的峰面积。以进样量( X) 为横坐标、峰面积( Y) 为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程。士的宁为Y = 2 563. 9 X - 18. 393，R2 = 0. 999 4 ( n = 6 ) ，士的宁进样量在0. 056 ～ 0. 336 mu;g 范围内与峰面积线性关系良好; 盐酸小檗碱为Y = 3 353. 4 X - 20. 588，R2 = 0. 999 5( n = 6 ) ，盐酸小檗碱进样量在0. 096 ～ 0. 576 mu;g 范围内与峰面积线性关系良好。精密度试验: 取同一对照品溶液，重复进样5 次。结果士的宁峰面积的RSD 为0. 6% ( n = 5) ，盐酸小檗碱峰面积的RSD 为0. 8% ( n = 5 ) ，表明仪器精密度良好。稳定性试验: 取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4，6，8，10 h 时在拟定色谱条件下进样检测。结果士的宁峰面积的RSD 为1. 2% ( n = 7 ) ，盐酸小檗碱峰面积的RSD 为1. 4% ( n = 7 ) ，表明供试品溶液在10 h 内稳定。重复性试验: 取同一批样品5 份，精密量取，依法制备5 份供试品溶液，进样测定。结果士的宁峰面积的RSD 为1. 3