上册篇研究报告.ppt

? 竞争性抑制作用（competitive inhibition）： 竞争性抑制作用指某些抑制剂的化学结构与底物相似，和底物竞争酶的结合部位，从而影响了底物与酶的正常结合，其抑制程度取决于底物及抑制剂的相对浓度，这种抑制作用可以通过增加底物浓度而解除。从米氏方程可看出，加入竞争性抑制剂后，Vmax不变，Km变大。 uncompetitive inhibition ? noncompetitive inhibition ? 蛋白质二级结构（ protein secondary structure ） : 在蛋白质分子中的局部区域内氨基酸残基的有规则的排列，常见的二级结构有 α- 螺旋和 β- 折叠。二级结构是通过骨架上的羰基和酰胺基团之间形成的氢键维持的。 超二级结构（ super-secondary structure ）： 在球状蛋白质中，若干相邻的二级结构单元如α-螺旋，β-折叠，β-转角组合在一起，彼此相互作用，形成有规则的在空间上能辨认的二级结构组合体，并充当三级结构的构件，基本组合有：αα，βαβ，βββ。 蛋白质三级结构（ protein tertiary structure ） : 蛋白质的三级结构指蛋白质在各种二级结构单元的基础上，肽链借助次级键进一步折叠、卷曲成复杂的空间结构，它包括肽链中一切原子的空间排列方式，维系蛋白质三级结构的作用力是次级键。 α- 螺旋 (α-helix) ： 是蛋白质多肽链主链二级结构的主要类型之一。肽链主链骨架在氢键的作用下，围绕中心轴盘绕成螺旋状，称为α-螺旋结构。典型的α-螺旋结构是：每个氨基酸残基上的亚氨基氢与前面第四个氨基酸残基上的羰基氧形成链内氢键；每3.6个氨基酸残基上升一圈，每圈上升0.54nm，每个氨基酸残基绕轴旋转100°，一个封闭的氢键内有13个原子。 DNA双螺旋(DNA double helix) 1. 为右手、反平行双螺旋； 2. 主链位于螺旋外侧，碱基位于内侧； 3. 两条链间存在碱基互补：A与T或G与C配对形成氢键，称为碱基互补原则（A与T为两个氢键，G与C为三个氢键）；两条链配对偏向一侧，形成一个大沟和一个小沟 4. 螺旋的稳定因素为氢键和碱基堆砌力； 5. 螺旋的螺距为3.4nm，直径为2nm。 核酸的变性 在理化因素作用下，DNA双螺旋的两条互补链松散而分开成为单链，从而导致DNA的理化性质及生物学性质发生改变，这种现象称为DNA的变性(denaturation) 将热变性后的DNA溶液缓慢冷却，在低于变性温度约25～30℃的条件下保温一段时间（退火annealing），则变性的两条单链DNA可以重新互补而形成原来的双螺旋结构并恢复原有的性质。 将变性DNA经退火处理，使其重新形成双螺旋结构的过程，称为DNA的复性 退火（annealing）： 即DNA由单链复性变成双链结构的过程。来源相同的DNA单链经退火后完全恢复双链结构，同源DNA之间、DNA和RNA之间，退火后形成杂交分子。 熔解温度（melting temperature,Tm）： 指DNA加热变性时，双螺旋结构失去一半时的温度，成为熔解温度，用Tm值表示。 PCR技术: 为聚合酶链式反应，是以DNA聚合酶在体外扩增DNA片断技术，经历DNA变性、退火、聚合酶催化DNA链的延伸等三个步骤周而复始的过程。 增色效应(hyperchromic effect)：指DNA变性后双螺旋等高级空间构象被破坏，碱基暴露，其260nm紫外光的光吸收度增加的现象； AA分子带有相等正、负电荷时，溶液的pH值称为该AA的等电点（isoelectric point, pI）。 什么叫蛋白质沉淀，有哪些沉淀蛋白的方法？ 要根据分子量分离蛋白可采用哪些方法？ 常用方法离子交换层析、凝胶过滤层析、PAGE、SDS的分离原理 凝胶层析VS PAGE PAGE vs SDS利用蛋白酶和化学试剂有选择地水解，结合Edman降解可确定大的蛋白质的序列。 ? 米氏常数（Michaelis constant,Km）：米氏酶的特征常数之一。在酶促反应中Km=（K2+K3）/K1，其物理意义是当酶促反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。 Active center of enzyme： 酶的活性中心是指酶分子上必需基团比较集中并构成一定空间构象、与酶的催化活性直接相关的结构区域，或是指酶分子中能与底物结合并起催化反应的空间部位。通常包括结合部位和催化部位。结合部位决定酶的专一性，催化部