1株高效香油降解菌株的筛选及其降解特性研究.doc

1株高效油脂降解菌株的筛选及其降解特性研究 李军红1，田胜尼2，彭少麟3*，杨 正1 1. 合肥工业大学生物与食品工程学院，安徽 合肥210091；2. 中国科学院华南植物园，广东 广州 510650； 3. 中山大学生命科学院，广东 广州 510275 摘要：从学校餐厅污泥中分离得到7株油脂降解菌。以芝麻油为唯一碳源，通过驯化培养、初筛和复筛得到1株芝麻油降解优势菌株。菌种特性研究表明其为好氧菌，降解芝麻油的最适温度为30~37 ℃左右，pH值为8.0；在最佳生长环境下，该菌株在含20 g·L-1芝麻油的培养基中72 h内对油脂的降解率达80％以上。 关键词：芝麻油降解菌；筛选；降解特性 中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（2006）02-0244-04当前，全球污染日益严重，自然环境不断恶化，人口增长对资源（特别是水）的压力越来越大[1]。在人口膨胀的今天，淡水资源愈发显得珍贵，然而仍然有许多因素在侵蚀着有限的淡水资源，其中油脂污染便是其中最为重要的因素之一，因此，寻找快速简便的解决水中油脂污染的途径已经迫在眉睫[2]。对于这类油脂废水的处理，人们常采用筛滤、沉淀、隔油、絮凝、吸附、电解等物理和化学方法，这些方法一般投资大、流程复杂、且化学方法会容易产生二次污染。相比之下，微生物能利用油脂作为生长的碳源和能源，使之水解成甘油和脂肪酸，最终降解为水和CO2等代谢产物，这种方法成本低、无二次污染，同时微生物降解油脂还具有来源广泛、选用便利、操作简单等而优点[2]。因此，从自然环境中寻找高效降解油脂菌株用于含油废水的治理是一项非常有意义的工作，是极具发展前景的生物修复方法，受到国内外学者的重视[3-4]。本文通过对学校餐厅污泥的筛选，分离出高效降解芝麻油的菌株并对其菌株特性及降解特性进行了初步研究，以期为油脂污染的淡水和土壤进行生物修复提供理论参考。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 污泥来源 合肥工业大学餐厅排污池。 1.1.2 培养基成份[5] 驯化培养基（g·L-1）：K2HPO4 1.0，KH2PO4 1.0，Na2HPO4 1.0，NaCl 0.5，MgSO4·7H2O 0.5。 初筛培养基（g·L-1）：（NH4）2SO4 2.0，KH2PO4 1.0，MgSO4·7H2O 0.5，琼脂 20.0，每皿2滴芝麻油。 复筛及发酵培养基（g·L-1）：（NH4）2SO4 2.0，K2HPO4 2.0，NaH2PO4 2.0，NaCl 2.0，MgSO4·7H2O 0.5，芝麻油 20.0。 牛肉膏蛋白胨培养基（g·L-1）：牛肉膏 5.0，蛋白胨 5.0，葡萄糖 3.0，NaCl 5.0， pH 7.4。 1.2 实验方法 1.2.1 菌株的驯化 将取自餐厅排污池中的污泥悬浮液接种于含5.0 g·L-1芝麻油的驯化培养基中，置于30 ℃的恒温摇床中培养，7 d为1个周期。每周期结束后，取驯化菌液渐次移至含油量为10.0、20.0 g·L-1的驯化培养基中培养。在驯化的每个周期内，每24 h对芝麻油质量浓度进行测定。 1.2.2 油脂含量的测定 采用紫外分光光度法[6-7]。 1.2.3 菌种的分离 取出已驯化的菌种，制成菌悬液并进行适当稀释后涂布于牛肉膏蛋白胨培养基平板上。30 ℃培养24 h。挑取平板中的菌落，划线分离直至得到单菌落。将生长的菌落挑至斜面保藏培养基，供初筛用。 1.2.4 菌种的初筛 将分离得到的单菌落菌体于牛肉膏蛋白胨液体培养基中30 ℃培养24 h，经适当稀释后涂布于表面均匀涂布2滴芝麻油的初筛平板上，置于30 ℃条件下培养72 h，选取在平板上生长的菌株，接种斜面保藏。 1.2.5 菌种的复筛 挑取新鲜初筛菌株斜面种子，接入复筛培养基中，30 ℃培养72 h后测定每种发酵液中的芝麻油含量。确定对芝麻油有较好降解能力的菌株作为降解优势菌。 1.2.6 优势菌最适生长条件的确定 以芝麻油为唯一碳源，分别将优势菌置于不同的油质量浓度、pH、温度和摇床转速等条件下进行培养，每组实验作3个重复，取其平均值确定其最适生长条件。 2 结果与讨论 2.1 油脂高效降解菌株的筛选 将从餐厅排污池中取得的污泥悬浮液进行驯化培养后，利用稀释涂布平板法进行牛肉膏蛋白胨平板分离及以芝麻油为唯一碳源的初筛培养基平板筛选，初筛出7株可利用芝麻油的菌株，其在平板上的菌落形态及芝麻油降解能力见表1。再通过检测生长吸光度的方法检测该7菌株降解芝麻油的能力，结果如图1所示。 表1 10株分离菌株的菌落形态及油脂降解能力 Table 1 The status of 10 separations str