第3章生物化学基础与代谢工程.pptVIP

生物化学基础与代谢工程 一、生物化学基础 1) 蛋白质、维生素和辅酶 2) 激素与细胞信号传导 3) 新陈代谢引论 二、代谢工程 1) 代谢工程的基本思路、基本过程与基本原理 2) 代谢网络的结构组成及其基本类型 3) 代谢工程的设计技术及应用实例 4) 代谢工程技术的优势与局限 一、生物化学基础 1、蛋白质 1.1、蛋白质的基本结构单位—氨基酸 1.1.1 氨基酸的基本结构 1.1.2 氨基酸的分类及其结构 1）非极性氨基酸：丙氨酸、 缬氨酸、 亮氨酸、 异亮氨酸、脯氨酸、 色氨酸、 苯丙氨酸、 甲硫氨酸 2）极性、不带电荷氨基酸：丝氨酸、 甘氨酸、 苏氨酸、半胱氨酸、 天门冬酰胺、 谷氨酰胺、 酪氨酸 3）酸性氨基酸：天门冬氨酸、 谷氨酸 4）碱性氨基酸：精氨酸、 赖氨酸、 组氨酸 1.1.3 蛋白质中不常见的氨基酸 1.1.4 非蛋白质氨基酸 1.1.5 氨基酸的理化性质 1）一般物理学性质 A. 外观形状：无色晶体或粉末状 B. 熔点高：200-300℃ C. 溶解性质： D．光学性质：旋光活性和紫外吸收 旋光活性：L型和D型氨基酸在旋光仪中的旋光方向相反，但角度相同。溶液中的氨基酸使平面偏振光偏向左的为左旋异构体，偏向右的为右旋异构体。 氨基酸的吸收光谱 氨基酸的理化性质 (2) 氨基酸的化学性质 A. 氨基酸的酸碱性质 氨基酸的理化性质 B. 等电点：pI (等电pH) 在一定的 pH条件下，氨基酸分子中所带的正电荷和负电荷数相等，即净电荷为零，此时溶液的 pH 称为该氨基酸的等电点（isoelectric point）。氨基酸在等电点时溶解度最小。 pK值：指某种解离基团有一半被解离时的pH值。 pI的计算: pI = 1 / 2 ( pK1+pK2 ) 氨基酸的理化性质 1.1.6 氨基酸的化学反应 1）茚三酮反应 2）亚硝酸反应 3）2.4-二硝基氟苯反应（FDNB） 4）甲醛的反应 5）二甲基氨基萘磺酰氯反应（DNS-Cl） 6）氨基酸与酰化剂（苄氧羰酰氯）的反应 7）α-羧基的成酯反应 8）侧链基团参加的反应 1.1.7 氨基酸的分离和分析鉴定 1）蛋白质的水解 A. 酸水解：6 mol/L HCl，110 –120℃，24 h B. 碱水解：5 mol/L NaOH，110 ℃，24 h C. 酶水解 2）氨基酸的分离鉴定 A. 纸层析 B. 薄层层析：硅胶、氧化铝、纤维素粉等 C. 离子交换层析：离子交换树脂、原理、方法 1.2 蛋白质的结构 蛋白质的结构层次：一级结构、二级结构、超二级结构、结构域、三级结构、四级结构 1.2.1 蛋白质的一级结构：蛋白质多肽链中的氨基酸排列顺序，包括肽链数目和二硫键位置。蛋白质一级结构是高级结构的基础，它包含了决定蛋白质分子所有结构层次构象的全部信息。 (1) 肽键和肽链 肽键：一个氨基酸的α-羧基与另一个氨基酸的α-氨基之间脱去一分子水形成的共价键称为肽键。又称酰胺键。 肽链：多个氨基酸以肽键相连成链称肽链或多肽 （二肽、 三肽……多肽） (2) 二硫键：--S—S— 蛋白质的结构 (3) 蛋白质的一级结构测定—片段重叠法 测定步骤： a. 提纯蛋白质样品 b. 测定蛋白质的分子量和氨基酸组成 c. 氨基酸末端分析(N-末端和C-末端) d. 拆开二硫键 e. 专一水解肽链成大小不等的片段(化学法和酶法) f. 分离纯化各肽段并采用 Edman 降解法测序 g. 用重叠法推断肽链全部氨基酸序列 h. 二硫键的定位：(对角线电泳) 1.2.2 蛋白质的二级结构 蛋白质的二级结构：通过肽链上的羰基氧和亚氨基氢之间形成的氢键，使肽链主链骨架上的局部区域形成有规则的空间排布。这种主链上的、有规则的空间排布称为蛋白质的二级结构。包括：α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规卷曲。 1）酰胺平面和蛋白质的构象 A. 酰胺平面（肽平面 、肽单位） B. 蛋白质的构象（conformation） 酰胺平面 蛋白质的构型与构象 构型 (configuration)：一个分子中原子的特定空间排布。 构象 (conformation)：组成分子的原子或基团绕单键旋转而形成的不同空间排布。 蛋白质的结构 2）维持蛋白质构象的作用力 A. 氢键 B. 离子键 (盐键) C. 范德华力 D. 疏水作用 E. 配位键 F．二硫键 3）蛋白质二级结构的主要类型 α- 螺旋（α-helix）的结构 β-折叠：二条或多条几乎完全伸展的多肽链侧向聚集在一起，相邻肽链主链的氨基与羰基氧形成氢键。 β-拐角 在各种蛋白质中，可同时存在几种二级结构，也可只