01培养基的制备与灭菌答案.pptVIP

微生物学实验（2.5学分、50学时）陈毅明163.com 前言 微生物实验技术和方法是微生物学建立和发展的基础，曾为整个生命科学技术的发展做出过积极而重要的贡献。在其它生命科学分支领域，不断发挥着它独特的作用。因此，“微生物学实验”是一门十分重要的专业基础课实验！ （发酵、催化（酶）、基因、分子、细胞等） 实验项目 （1）培养基的制备与灭菌 （2）环境中微生物的检测 （3）微生物分离与纯化 （4）显微镜使用、微生物简单染色 （5）微生物的革兰氏染色 （6）微生物大小的测定和显微镜直接计数 （7）环境因素对微生物的影响 （8）微生物的菌种诱变 （9）微生物生理生化反应 （10）自设实验 成绩评定 （1）平时成绩：30% （2）实验报告：30% （3）考核（操作）：40% 实验报告要求： 1、实验题目； 2、实验目的； 3、实验材料； 4、实验原理； 5、实验内容（实验方法、简单实验步骤）； 6、实验结果与讨论； 7、思考题。 ★独立完成！ 实验一：培养基的制备与灭菌 1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备； 2、高压灭菌的原理与应用范围，高压灭 菌器的操作技术； 3、干热灭菌的原理与应用范围，干热灭菌器的操作技术； ※ 紫外线灭菌、微孔滤膜过滤除菌，超高温除菌。 　实验一：培养基的制备与灭菌 1、明确培养基配制原则，掌握配制方法2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。 实验目的： 1培养基的制备（成分）： 培养基的组成因细菌、霉菌、放线菌、酵母这些微生物的种类而定，但主要包括以下几种成分：水分、氮源、碳源、无机盐、生长因子。 1、水分：主要成分； 2、氮源： （1）无机N:如氨态氮、硝态氮、尿素、氨水、硫氨、硝酸铵； （2）有机N:如氨基酸、蛋白质、蛋白胨、游离N（即气态氮）。 3、碳源：一般微生物如细菌中的异养型主要碳源是含碳的有机化合物，碳氢化合物等。 4、无机盐：如NaCl KH2PO4 等 　　微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。 有些细菌除上述成分外还需要添加 “生长因子”，他们通常是维生素类（如B族维生素）某些氨基酸或核酸等。 培养基的成分： 5、pH 霉菌、酵母偏酸pH4.5---5.5,配制时须把pH值调高些。细菌、放线菌中性或碱性。（自然即可）微生物在生长中有可耐受的pH值范围，琼脂在pH5以下有酸解现象，如不调pH固体培养基不凝固。 2培养基配制的原则： 有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%如果已知在发酵过程中多产酸或偏产碱，可适当加入酸性盐或碱性盐。 培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。 　3培养基分类一（成分）： （1）天然培养基：马铃薯、玉米粉、豆饼粉、　　　 　　　　　　　　 豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨 （2）合成培养基：如查氏培养基用于营养代谢、 　　　　　　　　 分类鉴定、选育； （3）半合成培养基：天然有机物加化学药品如 PDA培养基。 培养基分类二（状态）： （1）固体培养基； （2）半固体培养基； （3）液体培养基。 ＊依据凝固剂的多少，是否添加而定。 ＊添加凝固剂（琼脂、明胶、硅胶 （自养微生物）） (1)基础培养基：细菌的普通培养基（牛肉膏蛋白胨） (2)营养培养基（加富）：苛求特殊营养，加血清、血液、组织液、酵母高生长因子 (3)鉴别培养基：某代谢产物需特定化合物或试剂。（某种微生物在这种培养基上培养后某代谢产物与这种特定的化合物或试剂能发生某种明显的特征。因此可以区别不同微生物） (4)选择培养基：抑制不需要的，利于所需微生物生长如马丁培养基选择真菌。 培养基分类三（用途）： 二、消毒与灭菌： 消毒（disinfection）：消灭病原菌和有害微生物的营养体。 灭菌（sterilization）：杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子。 1、灭菌可分为： （1）干热灭菌：A)火焰烧灼如接种工具、试管口、瓶口；　　 　B)利用电烤箱（160℃—170℃）玻璃器皿 2小时 ； （2）湿热灭菌：A)高压蒸汽—0.1MPa、121℃、15—30min 残留冷空气排除—空气膨压水蒸气膨压，同一压力下含空气的水蒸汽温度低于蒸汽温度。 （3）超高温杀菌（ultra high temperature sterilization,UHTS）:135℃—150℃ 几秒钟对牛乳、果汁、液态食品进行处理的一种工艺，即能杀死产品中的微生物又能保护产品的品质和营养价值。 过滤除菌： 如血清、抗生素、糖类溶液常用此方法除菌，细菌被截留在膜上。实验室中用微孔滤膜（