药理学实验方法学讲稿课件.pptVIP

参考资料： (1)中药药理实验方法学 (2)药理学实验方法 (3)定量药理学 (4)中国药典 (5)中国兽药典 (6)兽药质量标准 (7)中国兽药信息网 (8)兽药试验技术规范汇编(农业部兽药评审委员会办公室) (9)生物统计学 第一章 药物含量测定 (一) 测定方法的建立 　 根据不同的药物，建立不同的测定方法。 1.原子吸收法 (1)原子吸收法光谱的产生 任何元素的原子都由原子核和核外电子组成，核外电子有不同的能级，因此，一个原子核可以有不同的能级。能量最低的能级态，称为基态能级(E0=0)，其余的能级称为激发态能级，而能量最低的激发态称为第一激发态。 正常情况下，原子处于基态，核外电子在各自能量最低的轨道上运动。 当原子吸收一定的能量时，该原子就会吸收一定特征波长的光，外层电子由基态跃迁到相应的激发态，产生原子吸收光谱。但激发态的电子是不稳定的，大约经过10～8 s以后，激发态的电子将返回基发态或其他较低能级，并将电子跃迁时所吸收的能量以光的形式释放出去，而产生原子发射光谱。 核外电子从基态跃迁至第一激发态所吸收的谱线称为共振线吸收，简称共振线。而电子从第一激发态返回至基态所发射的谱线称为第一共振发射线。由于基态与第一激发态之间的能级最小，电子跃迁机率最大，故共振线最易产生。对多数元素来讲，它是所有谱线中最灵敏的，在原子吸收光谱分析中，通常以共振线为吸收线。 (2)原子吸收光谱分析原理 原子吸收光谱分析的波长区域在紫外区。其原理是将光源辐射出的待测元素的特征光谱，通过样品的蒸气时，就会被待测元素的基态原子吸收，由发射光波被减弱的程度，进而求得样品中待测元素的含量，它符合郎珀-比尔定律： A=－lg I/I０= －lg T = kCL 式中I为透射光强度，I0为发射光强度，T为透射比，L为光通过原子化器的光程。由于L是不变值，所以A=KC。 2.比色分析法 用比较溶液的颜色深度来确定被测定物质含量的方法，称为比色分析法。 光通过有色溶液时，由于溶液中有色物质吸收了一部分光能，透过光的强度就要减弱。溶液的浓度越高，液层越厚，对光的吸收就越多，透过的光也就越弱。 如果把浓度为C的有色溶液置入厚度为L的容器中，一定波长的光通过时，由于溶液吸收了一部分光，透过光的强度就会减弱。 这个过程也符合郎珀-比尔(Lambert-Beer)定律： A = KCL 浓度越大，吸收强度多，透过的光也就越少，光电池受光就弱，产生的电流也就越弱，吸光度就越大。 72系列：可见光 75系列：紫外光 根据药物的性质，它在什么波长下有最大吸收，就选什么仪器。 3.色谱分析法 色谱分析法是用于分离、分析多组分混合物质的一种极为有效的物理及物理化学分析方法。它是利用混合物中各组分在两相间分配系数的差异进行分离的。当混合物在两相间作相对移动时，各组分在两相间进行多次分配，从而达到分离。 色谱分析法有两种： (1)按固定相形态分：柱色谱法、薄层色谱法、纸色谱法。 (2)按流动相形态分：气相色谱法、液相色谱法。 具体方法可参阅“仪器分析”的有关教材。 （二）方法的方法的准确性和稳定性 1.标准曲线的建立 在比色法中，吸光度与溶液浓度之间有线性关系，不是说在任何浓度下都呈线性，它只有在一定浓度范围内有线性关系。 故在定量分析时，将标准品配成不同浓度进行测定，找出它的线性范围，制作标准曲线。 测定时： (1)查找法：在制作标准曲线上直接查照。该方法比较直观，但 比较粗糙。 (2)回归方程，用方程进行计算。 C=a＋bA 式中，C为浓度，a为截距，b斜率， A为吸光度。 2.回收率——方法的准确度 考察样品基质对测定的干扰情况。 1.0g~0.8g 80% 0.8g~1.0g 125% 方法：添量法　以血清样本为例： 回收率＝(血清＋标准品)测定值－血清测定值）×100% 　　　　　　　　　　标准品浓度 通俗