血管生成素―1对脂多糖所致肺损伤和炎症反应的影响.docVIP

血管生成素―1对脂多糖所致肺损伤和炎症反应的影响 　　[摘要]目的 探讨血管生成素-1（Ang-1）在脂多糖所致肺损伤和炎症反应中的保护作用。方法 将30只雄性KM小鼠随机分为对照组，LPS组，Ang-1组，每组10只，经气管内滴入脂多糖构建急性肺损伤（ALI）模型，建模前24 h经尾静脉注入带绿色荧光蛋白的重组腺病毒（Ad-GFP，LPS组）或带人Ang-1的重组腺病毒（Ad-GFP-Ag-1，Ang-1组），对照组给予等量生理盐水。建立ALI 24 h后处死全部小鼠，测定肺湿干比，观察组织形态学变化，酶联免疫吸附试验检测血清白细胞介素-6（IL-6）水平及肺泡灌洗液中粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）水平。结果 Ang-1组肺湿干比为4.05±0.16，明显低于LPS组的5.46±0.07；Ang-1组血清IL-6水平为（173.07±10.05）ng/ml，明显低于LPS组的（324.61±8.92）ng/ml；Ang-1组肺泡灌洗液GM-CSF水平为（15.05±1.21）ng/ml，明显高于LPS组的（10.24±1.35）ng/ml；与LPS组比较，Ang-1组的肺组织病理学损伤明显减轻。结论 Ang-1能减轻LPS所致的肺组织损伤和炎症反应。 　　[关键词]血管生成素-1；肺损伤；脂多糖；炎症反应 　　[中图分类号] R563 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）09（a）-0019-04 　　急性肺损伤（acute lung injury，ALI）是各种直接或间接因素导致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤，造成弥漫性肺间质及肺泡水肿，导致急性低氧性呼吸功能不全。ALI过程中伴随有单核细胞浸润、中性粒细胞凋亡，巨噬细胞吞噬等过程[1]。除此之外，ALI的发展过程还伴随内皮细胞的激活和损伤。ALI中内皮细胞是受损的主要靶细胞，内皮细胞损伤是ALI的重要标志，在疾病复杂的病理机制中，内皮细胞的活化与损伤起重要作用，其程度与预后密切相关。 　　血管生成素-1（Ang-1）属于血管生成素家族成员，其通过与血管内皮细胞和造血干细胞上的酪氨酸蛋白激酶受体2（Tie-2）结合，并使Tie-2受体快速磷酸化而促进血管内皮细胞的移行与存活[2]。在内毒素性肺损伤中，通过增加Ang-1的方法可有效抑制血管内皮细胞活化、损伤，减少内皮细胞相关黏附分子表达，降低肺血管通透性，抑制炎性细胞浸润，并提高ALI小鼠存活率。因此表明，Ang-1可以稳定血管内皮细胞，在炎症的发生阶段有着很好的抗炎作用[3]，但是对炎症消退的影响尚不清楚。本研究通过气管内滴入脂多糖制作急性肺损伤小鼠模型，取肺泡灌洗液和血液，离心并测定炎症因子，测定肺湿干比，HE染色观察肺损伤情况，以探讨Ang-1是否能够进一步减轻肺损伤和促进炎症消退。 　　1材料与方法 　　1.1实验动物及试剂 　　选择18～22 g的清洁级KM小鼠，购自河南省动物实验中心，小鼠许可证号SCXK（豫）2010-0002。动物饲料20 kg，供自河南省动物实验中心。所有实验动物饲养于河南大学第一附属医院肿瘤分子免疫实验室，环境清洁，温度17～23℃，相对湿度45%～55%，光照随昼夜变化，自由饮水、摄食。 　　携带人Ang-1的重组腺病毒购自郑州赛斯生物科技有限公司，滴度为1012 PFU/ml；IL-6和GM-CSF试剂盒购自郑州赛斯生物科技有限公司；戊巴比妥钠，规格：5 g，购于北京普博斯生物科技有限公司。 　　1.2模型构建及分组 　　对照组10只，经尾静脉注入携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒（Adenoviral-GFP）109 PFU，24 h后经口气管插管滴入生理盐水2 μl/g。 　　LPS组10只，经尾静脉注射携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒（Adenoviral-GFP）109 PFU，24 h后经口气管插管滴入1.5 mg/ml LPS 2 μl/g。 　　Ang-1组10只，经尾静脉注射携带人血管生成素1的重组腺病毒（Adenoviral-Ang-1）109 PFU，24 h后经口气管插管滴入1.5 mg/ml LPS 2 μl/g。 　　1.3实验方法 　　于脂多糖应用后24 h用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（10 g/kg），麻醉后将小鼠四肢固定于手术台上，在大鼠颈部切开一个长约1 cm的切口，用镊子沿皮下钝性分离充分暴露出气管，用20 ml空针针头在气管3～4软骨环之间沿气管插入，用丝线结扎并固定，并用丝线结扎右侧主支气管。 　　1.4检测指标 　　1.4.1血清白细胞介素-6（IL-6）浓度 于LPS应用后24 h尾静脉采血，4℃下2000 r/min离心15 min，收集血清，-80℃保存。采用双抗体夹