青蒿琥酯白蛋白纳米粒的制备及抗肿瘤活性初步研究.docVIP

青蒿琥酯白蛋白纳米粒的制备及抗肿瘤活性初步研究 　　【摘 要】 目的：探讨青蒿琥酯白蛋白纳米粒的最优制备条件及对肿瘤细胞的体外抑制情况。方法：以青蒿琥酯包封率为定量指标成分，确定牛血清白蛋白质量，青蒿琥酯浓度，旋蒸转速等影响因素，并以L9（33）正交实验安排实验；根据结果筛选出最优处方后，考察纳米粒的体外释放情况；MTT法考察纳米粒对人肺癌细胞A549的体外抑制率，并与青蒿琥酯原料药比较。结果：最佳制备条件为：取500μL浓度为35mg/mL的牛血清白蛋白水溶液，在涡旋的情况下滴加浓度为500μg/mL的青蒿琥酯无水乙醇溶液，待溶液变成乳白色后，停止滴加，置于旋蒸仪上设置转速为1000r/min，时间为30min。根据此条件制得的纳米粒平均包封率82%；体外释放试验前期有明显突释现象，前4h累积释放度为46%，其后释放均匀，24h累积释放度达92%，具有缓释作用；其在24h对细胞抑制率高于青蒿琥酯组，有较强抑制作用。结论：在最优制备条件下，可增加原料药的包封率，所制青蒿琥酯纳米粒在体外具有较好的缓释性，对肿瘤细胞有较强的抑制作用。 　　【关键词】 青蒿琥酯；白蛋白纳米粒；正交试验；MTT试验 　　【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）24-0033-04 　　青蒿琥酯（Artesunate，AS）化学名为二氢青蒿素-1，2-α-琥珀酸单酯，分子式为 C19O8H28，分子量384，是具有倍半萜结构的抗疟药青蒿素的衍生物。研究发现[1-2]，青蒿琥酯除抗疟外，尚有治疗其它寄生虫病、抗肿瘤等作用。目前，临床使用的主要有青蒿琥酯片剂、青蒿琥酯的粉针剂。但是青蒿琥酯的口服片剂不能克服肝脏的首过效应，吸收程度较差；粉针剂吸收快、消除也快、生物利用度小。研究通过纳米给药系统对青蒿琥酯的现有剂型进行改进，可以克服 AS 现有剂型存在的缺陷，提高其生物利用度，增加药物疗效。并且对其抗肿瘤活性进行初步研究。牛血清白蛋白（BSA）来源于血浆，溶解度高而且安全稳定又无毒。笔者以青蒿琥酯为原料药，以BSA作为载药材料，采用去溶剂化-交联法并通过正交试验选取最优处方，制备出青蒿琥酯BSA纳米粒，现报道如下。 　　1 仪器与材料 　　1.1 仪器 KQ-300E型超声机（昆山市超声仪器有限公司）；旋转蒸发器 （Sigma-aldrich）；WH-2微型涡旋混合仪（上海沪西分析仪器厂）；UV-2450紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；万分之一电子天平（日本岛津公司）；恒温水浴锅（上海亚荣生化仪器厂）；透析袋（MV：1000-3000，美国spectrum 公司）；XD-101型倒置显微镜（日本 OLYMPUS公司）；全自动酶标仪（美国Bio-Rad公司）；Haier生物安全柜（青岛海尔特种电器有限公司）；Thermo CO2培养箱（赛默飞世尔科技有限公司）；TDL-4型低速离心机（上海安亭科学仪器厂）。 　　1.2 试药 牛血清白蛋白（BSA，FractionV SIGMA公司）；无水乙醇（分析纯，天津永晟精细化工有限公司）；戊二醛50%水溶液（分析纯，沈阳市华东试剂厂）；氢氧化钠溶液（分析纯，沈阳市华东试剂厂）；青蒿琥酯（AS，中国药品生物制品检定所）；A549细胞（辽宁医学院科学实验中心）；胎牛血清（沈阳鼎国生物技术有限公司）；DMEM（高糖培养基，沈阳鼎国生物技术有限公司）；胰蛋白酶（沈阳鼎国生物技术有限公司）；PBS（沈阳鼎国生物技术有限公司）；MTT（沈阳鼎国生物技术有限公司）；细胞培养瓶（美国康宁公司）；96孔板（美国康宁公司）；所用水为去离子水。 　　2 方法 　　2.1 青蒿琥酯标准试液配制 精密称取干燥至恒重的青蒿琥酯250.0mg置50mL容量瓶中，加0.02%NaOH至刻度，摇匀，制得5mg/mL的青蒿琥酯贮备液。 　　2.2 测定波长的选择[3] 准确移取青蒿琥酯标准试液0.2mL置于10mL容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀。将制得溶液在50℃水浴加热30min后，以无水乙醇为空白对照，变化波长在200～600nm，测定吸光度A。结果表明在238nm时，具有最大A值，所以确定238nm为最大吸收。 　　2.3 青蒿琥酯标准曲线的绘制[4] 精密吸取青蒿琥酯标准试液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mr分别置于10mL容量瓶中，加0.02%NaOH至刻度，摇匀制得溶液，50℃水浴加热30min。以无水乙醇为空白对照，在238nm波长处测定吸收度，以吸收度A、浓度C绘制标准曲线。并求出回归方程为：A=0.0431C+0.00067（r2=0.9999），青蒿琥酯溶液在0.5～3.0mg范围呈线性关系。 　　2.4 青蒿琥酯白蛋白纳米粒的制备