维生素B12的含量测定.doc-新乡医学院.doc

新乡医学院分析化学实验课教案首页 授课教师姓名及职称： 一、实验名称 维生素B12的吸收曲线绘制及注射液的含量测定 二、授课对象 药学 授课形式 实验教学 三、教学目标 1．掌握分光光度计的使用方法 2．掌握注射剂含量的测定和计算方法 3．熟悉测绘吸收曲线的一般方法 四、教学内容 1．吸收曲线的绘制方法 2．应用吸光系数法测定注射剂含量及计算方法 3．752型紫外－可见分光光度计的使用方法 五、教学安排 与课时分配 1．讲解演示 min 2．学生操作 教师辅导 min 六、授课重点 1．吸收曲线的绘制方法 2．752型紫外－可见分光光度计的使用方法 七、注意事项 1．752型分光光度计光源的使用 每次改变波长，需重新调“0” 3．B12应避光教师示范讲述，学生操作自编教材B12的吸收曲线绘制及注射液的含量测定 一、实验目的 1. 掌握分光光度计的使用方法2. 掌握注射剂含量的测定和计算方法3. 熟悉测绘吸收曲线的一般方法。 维生素B12是含Co的有机化合物，其注射液为粉红色至红色的澄明液体。要测定B12注射液的含量，可以用紫外－可见分光光度法测定，用此法进行含量测定，必须知道B12的λmax，λmax可以通过绘制吸收曲线来得到。 吸收曲线：将不同波长的单色光依次通过被分析的物质，分别测得不同波长下的吸光度，以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标所描绘的曲线。吸光度最大时对应的波长为λmax，在λmax处测吸光度。B12在278，361，550nm处有最大吸收，在λmax处测得A，根据吸光系数法可以求出注射液中B12的含量。 吸光系数法：A=Ecl 实验中要求测361nm处的A，相应的吸光系数为207。 752型紫外－可见分光光度计，10mL容量瓶，5mL吸量管；0.1g·L-1维生素B12水溶液，维生素B12注射液(市售品)。 1．752型分光光度计的使用 （1）开启电源开关，使仪器预热20分钟。 （2）用波长选择旋钮设置所需的分析波长。 3）将装参比溶液的比色皿置于光路，打开样品室盖，调节T旋钮，使显示器指针指在“0.00％”。 （4）将装参比溶液的比色皿置于光路，关闭样品室盖，调节A旋钮，使显示器指针指在“100.00％”。 （5) 重复操作(3)和(4)，直至仪器显示稳定。 （6）将装参比溶液的比色皿置于光路，关闭样品室盖，进行测定，在显示器上读出A。 7）仪器使用完毕，关闭电源，拔下电源插头。取出比色皿，洗净、晾干。复原仪器，盖上防尘罩。 2．吸收曲线的绘制 将0.1g·L-1维生素B12溶液置于1cm比色皿中，以蒸馏水为空白溶液，在不同波长(340nm~580nm之间，其中从350nm~370nm和540~560nm每间隔5nm测量一次，其余每间隔20nm测量一次吸光度)下测量相应的吸光度。然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘出吸收曲线。从吸收曲线上得到最大吸收波长，从而选择测定维生素B12的适宜波长。 3．注射液含量测定 避光操作。准确吸取0.50ml维生素B12注射液于10ml容量瓶中，加水定容至刻度线。然后将溶液置于1cm比色皿中，在361nm波长条件下以蒸馏水作为空白测定吸光度，按C63H88CoN14O14P的吸收系数为207计算维生素B12标示量的百分含量。 计算公式： 五、注意事项 1．在每次测定前，首先应做吸收池配套性试验。即将同样厚度的4个比色皿都装相同溶液，在所选波长处测定各比色皿的透光率，其最大误差?T应不大于0.5%。 2．仪器在不测定时，应随时打开暗箱盖，以保护光电管。 3．为使比色皿中测定溶液与原溶液的浓度一致，需用原溶液荡洗比色皿2~3次。 4．比色皿内所盛溶液以超过皿高的2/3为宜。过满溶液可能溢出，使仪器受损。使用后应立即取出比色皿，并用自来水及蒸馏水洗净，倒立晾干。 5．比色皿一般用水荡洗，如被有机物污染，宜用HCl－乙醇(1+2)浸泡片刻，再用水冲洗，不能用碱液或强氧化性洗液清洗。切忌用毛刷刷洗，以免损伤比色皿。 6．λ＜350nm时使用氢灯，λ＞350nm时使用钨灯。 六、思考题 1．单色光不纯对于测得的吸收曲线有什么影响? 2．利用邻组同学的实验结果，比较同一溶液在不同仪器上测得的吸收曲线有无不同。试作解释。