一种简便的ε聚赖氨酸产生菌的筛选方法.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四次全国发酵工程学术讨诸套论文采 一种简便的￡一聚赖氨酸产生菌的筛选方法 张超，张东荣，贺魏，段作营，毛忠贵 (江南大学生物工程学院．无镑214036) 摘要：建立了一种灵敏的r聚赖氨醺产生苗的筛选方法。由于e-聚赖氨酸是一种带正电 荷的生物碱，利用产正电分泌物的菌株和美蓝之同的静电作用而形成独特的透明圈，从而曼 敏地筛选得到产正电分泌物的菌株I利用Dra_gendorff试荆与生物碱特有的颜色反应从菌株 中挂出得到3株生物碱产生苗f最后对产生物碱的苗株发酵液进行rPL音量分析，确定1 altm— 株t-PL高产苗z一18。对其进行鉴定，结果表明z一18为白色链霉菌(StreptomycPi f埘)。 关键词：菌株筛选IE-聚赖氨酸；白色链毒菌 c_聚赖氨酸(￡．PL)是由微生物合成的L-赖氨酸同聚物，由e氨基与a羧基通过肽键 连接而成，其聚合度一般为25～35“1。它是日本酒井平一和岛昭二两位博士在大量筛选 有价值的放线菌时发现的一种新型聚合物，经过进一步研究发现其具有强烈的抑菌能 力，可以作为防腐剂用于食品的保鲜…。 c_聚赖氨酸的产生菌主要有三类：白色链霉菌，北里孢菌属和麦角真菌。Nishikawa 等采用一种简便的方法调查了土壤中各种￡一PL产生菌，发现大多数e—PL产生菌集中在 链霉菌科的几个不同的属和麦角真菌这两类微生物上，且不同菌株的产物其赖氨酸单体 数也有所不同(n—lO一36，10一24，8—9)[…。 e-聚赖氨酸产生菌的筛选方法十分复杂，所以这已经成为r聚赖氨酚研究的“瓶颈”。 国内有很多科研院校从事e_聚赖氨酸的研究，基本上都是“卡”在e_聚赖氨酸产生菌的筛 选这一步。传统的方法是从土壤中筛选出白色链霉菌，然后上摇瓶发酵，最后从发酵液 中检验是否成德拉根道夫阳性反应，最后再通过液相色谱的方法进一步验证，这种筛选 方法筛选了土壤中各种rPL产生苗，具体过程是：在SG培养基中加入0．02“酸性染料 PolyR一478或者碱性染料美蓝，如果有r聚赖氨酸的产生菌，那么它产生的e一聚赖氨酸 就会与染料通过静电作用而聚合，在平板上形成肉眼可见的特殊菌落形态，然后将菌落 周围的培养基挖出，通过一系列过程将其中的￡-聚赖氨酸洗脱下来，从而简化了筛选过 程[”。但这种方法仍存在很多不足，后期处理仍然比较烦琐，对设备要求也很高。总的 来说，至今仍未有准确性很高的简便筛选方法，这将仍是一大研究热点。笔者在筛选e一 聚赖氨酸产生菌的过程中，找到一种相对简便的筛选方法。 作者简介：张超，男，硕士生，主要研究方向；发酵工程． 第四次全国发酵工程学术讨论会 1材料与方法 1．1 ri襄赖氨酸产生菌的筛选 1．1．1土样 江苏、山东、河北、安徽、陕西等地采取。 1．1．2培养基 (1)贝特纳斜面培养基：葡萄糖1．0％，蛋白胨0．2oA，酵母浸膏0．1％，琼脂1．5％， 0．19，NaH2PO‘0．689，KH2PO,0．259，MgSO^·7H20 s04·7H。O0．059，FeSOl·7H20 0． 复筛培养基：甘油209，酵母膏59，Na2HPq0．89，KH2P04lg．MgSO．·7H20 259，(NHt)2SO,59，ZnSO,·7H200．059，FeS04·7H200．019，定容至1L，pH7．0，1 ×105Pa灭菌30min。 1．1．3SG培养基中美蓝浓度的确定 土样在室温下自然风干10d后，系列稀释后涂布平板，培养基中美蓝的浓度为0．001 ～o．03％。根据计算平板上的放线菌、真菌和细菌的菌落数确定添加美蓝的浓度。 1．1．4菌株筛选步骤 t 在土样中按10 1的比例加入碳酸钙，于室温下自然风干5～20d，碾碎过筛“]。