第九吸光光度法.pptVIP

第九章 吸光光度法 9.1 吸光光度法的基本原理 9.2 光度计及其基本部件 9.3 显色反应与显色条件的选择 9.4 吸光度测量条件的选择 9.5 吸光光度法的应用 不同物质吸收光谱的形状以及?max不同 －定性分析的基础 同一物质，浓度不同时，吸收光谱的形状相同，Amax不同 －定量分析的基础 9.1.2光的吸收基本定律:朗伯-比尔定律 朗伯定律:(1760) A=lg(I0/It)=k2b 意义: 当入射光的λ,吸光物质的c和溶液的t 一定时,溶液的吸光度A与液层厚度b成正比. 光吸收基本定律:朗伯-比尔定律 比尔定律(1852) A=lg(I0/It)=k4c 意义: 当入射光的λ,液层厚度b和溶液的t 一定时,溶液的吸光度A与吸光物质的c成正比. 光吸收基本定律:朗伯-比尔定律 意义: 当一束平行单色光通过均匀、非散射的溶液时，其吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比. T－透光率（透射比）（Transmittance） 吸光度A、透射比T与浓度c的关系 1968年IUPAC规定用4个量 A,T,ε,b A、T、b、k的名称 A＝kbc A 吸光度 Absorbance 光密度 Optical Density 用D或O.D表示 消光度 Extinction 用E表示 T 透射比 Transmission 透光度（率） Transmittance b 样品光程（Sample Path Length),单位为cm。 一般为吸收池厚度。 K 吸光系数 Absorptivity 消光系数 Extinction Coefficient 吸收指数 Absorbancy Index 当c的单位用g·L-1表示时，用a表示，A＝abc 当c的单位用mol·L-1表示时，用?表示. A＝ ?bc ?－摩尔吸光系数 Molar Absorptivity 或称摩尔吸光指数 Molar Absorbancy Index 当c的单位用g·100mL-1表示时，用 表示， A＝ bc， 叫做比消光系数(Specific Extinction Coefficient). 吸光度与光程的关系 A = ?bc A = ?bc 吸光度 A = ?bc A = ?bc 吸光度与浓度的关系 A = ?bc A = ?bc 吸光度与波长的关系A = ?bc 吸光度与波长的关系 A = ?bc 吸光度与波长的关系 A = ?bc 9.1.3 偏离朗伯-比尔定律的原因 当溶质浓度很高（一般0.01mol/L)时， 分子之间的距离与分子大小相比，静电作用影响摩尔吸光系数的偏离 样品中粒子的散射 待测样品在测定波长下发荧光或磷光 在高浓度的电解质溶液中，折射指数发生变化 随着浓度的增加，化学平衡发生移动 非单色光发射，尽量选用?max处测定 杂散光 吸光度的加和性 目视比色法 通过眼睛观察比较溶液深浅来确定物质含量的方法。 分光光度法的基本部件 分光光度计的主要部件（1） 光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够 的光强度且不随λ而改变。稳定。 可见光区：钨灯，碘钨灯 紫外区：氢灯，氘灯 单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的 装置。 分光元件：滤光片，棱镜，光栅 吸收池：(比色皿)用于盛待测及参比溶液。 可见光区：光学玻璃 紫外区：石英 分光光度计的主要部件（2） 检测器：利用光电效应，将光强度转换成 电流讯号。 光电池，光电管，光电倍增管 检流计（指示器）：将信号以适当方式显示 或记录。 低档仪器：刻度显示 中高档仪器：记录仪，数字显示 分光元件（1） 棱镜：依据不同波长光通过棱镜时有不同的 折射率而将不同波长的光分开。 玻璃：350～3200nm 石英：185～4000nm 滤光片（用在光电比色计上） 吸收滤光片：只允许指定的窄范围波长光通过， 其他波长的光均被吸收的滤光片(用于可见光区)。 检测器 -硒光电池（Barrier-layer photocell） 检测器--光电管 9.3 显色反应及显色条件的选择 9.3.1 显色反应 9.3.2 反应条件的确定 9.3.3 测定中的干扰以及消除方法 9.3.1显色反应的选择 灵敏度高，一般ε104 选择性好 显色剂在测定波长处无明显吸收。 对照性好, ?λmax60 nm . 反应生成的有色化合物组成恒定