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第九章 吸光光度法 9.1 吸光光度法的基本原理 9.2 光度计及其基本部件 9.3 显色反应与显色条件的选择 9.4 吸光度测量条件的选择 9.5 吸光光度法的应用 不同物质吸收光谱的形状以及?max不同 -定性分析的基础 同一物质,浓度不同时,吸收光谱的形状相同,Amax不同 -定量分析的基础 9.1.2光的吸收基本定律:朗伯-比尔定律 朗伯定律:(1760) A=lg(I0/It)=k2b 意义: 当入射光的λ,吸光物质的c和溶液的t 一定时,溶液的吸光度A与液层厚度b成正比. 光吸收基本定律:朗伯-比尔定律 比尔定律(1852) A=lg(I0/It)=k4c 意义: 当入射光的λ,液层厚度b和溶液的t 一定时,溶液的吸光度A与吸光物质的c成正比. 光吸收基本定律:朗伯-比尔定律 意义: 当一束平行单色光通过均匀、非散射的溶液时,其吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比. T-透光率(透射比)(Transmittance) 吸光度A、透射比T与浓度c的关系 1968年IUPAC规定用4个量 A,T,ε,b A、T、b、k的名称 A=kbc A 吸光度 Absorbance 光密度 Optical Density 用D或O.D表示 消光度 Extinction 用E表示 T 透射比 Transmission 透光度(率) Transmittance b 样品光程(Sample Path Length),单位为cm。 一般为吸收池厚度。 K 吸光系数 Absorptivity 消光系数 Extinction Coefficient 吸收指数 Absorbancy Index 当c的单位用g·L-1表示时,用a表示,A=abc 当c的单位用mol·L-1表示时,用?表示. A= ?bc ?-摩尔吸光系数 Molar Absorptivity 或称摩尔吸光指数 Molar Absorbancy Index 当c的单位用g·100mL-1表示时,用 表示, A= bc, 叫做比消光系数(Specific Extinction Coefficient). 吸光度与光程的关系 A = ?bc A = ?bc 吸光度 A = ?bc A = ?bc 吸光度与浓度的关系 A = ?bc A = ?bc 吸光度与波长的关系A = ?bc 吸光度与波长的关系 A = ?bc 吸光度与波长的关系 A = ?bc 9.1.3 偏离朗伯-比尔定律的原因 当溶质浓度很高(一般0.01mol/L)时, 分子之间的距离与分子大小相比,静电作用影响摩尔吸光系数的偏离 样品中粒子的散射 待测样品在测定波长下发荧光或磷光 在高浓度的电解质溶液中,折射指数发生变化 随着浓度的增加,化学平衡发生移动 非单色光发射,尽量选用?max处测定 杂散光 吸光度的加和性 目视比色法 通过眼睛观察比较溶液深浅来确定物质含量的方法。 分光光度法的基本部件 分光光度计的主要部件(1) 光源:发出所需波长范围内的连续光谱,有足够 的光强度且不随λ而改变。稳定。 可见光区:钨灯,碘钨灯 紫外区:氢灯,氘灯 单色器:将光源发出的连续光谱分解为单色光的 装置。 分光元件:滤光片,棱镜,光栅 吸收池:(比色皿)用于盛待测及参比溶液。 可见光区:光学玻璃 紫外区:石英 分光光度计的主要部件(2) 检测器:利用光电效应,将光强度转换成 电流讯号。 光电池,光电管,光电倍增管 检流计(指示器):将信号以适当方式显示 或记录。 低档仪器:刻度显示 中高档仪器:记录仪,数字显示 分光元件(1) 棱镜:依据不同波长光通过棱镜时有不同的 折射率而将不同波长的光分开。 玻璃:350~3200nm 石英:185~4000nm 滤光片(用在光电比色计上) 吸收滤光片:只允许指定的窄范围波长光通过, 其他波长的光均被吸收的滤光片(用于可见光区)。 检测器 -硒光电池(Barrier-layer photocell) 检测器--光电管 9.3 显色反应及显色条件的选择 9.3.1 显色反应 9.3.2 反应条件的确定 9.3.3 测定中的干扰以及消除方法 9.3.1显色反应的选择 灵敏度高,一般ε104 选择性好 显色剂在测定波长处无明显吸收。 对照性好, ?λmax60 nm . 反应生成的有色化合物组成恒定
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