人巨细胞病毒感染的检测方法.pdfVIP

人羁细胞病毒感染的检测方法 郭大东综述高雪芹审校 【摘要】人巨细胞病毒感染在器官移植、骨髓移植、免疫缺陷患者以及免疫 抑制治疗的患者体内常导致高发病率及致死率，而孕妇原发感染后易导致胎儿畸 形。因此，如何快速、准确、特异性地检测巨细胞病毒的感染成为关键。本文综 述了目前临床上常用的巨细胞病毒感染的检测方法，并对巨细胞病毒的特点也作 了简要的介绍。 【关键词l巨细胞病毒；检测；聚合酶链反应；DNA微阵列 【中图分类号】R373．9文献标识码：A 人巨细胞病毒(Human 的一种病毒性疾病。正常人群感染HCMV后，并不呈现明显的临床症状，但是 对于机体免疫能力低下的人群来说，原发感染、病毒潜伏感染后的复发可引起活 动性感染，并可引发严重的甚至是致死性的疾病。在器官移植、骨髓移植、免疫 缺陷患者以及免疫抑制治疗的患者中，HMCV感染是高发病率与致死率的重要 原因[1-q。孕妇原发感染HCMV后容易导致胎儿畸形，可产生低体重儿、小头 畸形、耳聋、视力损伤、智力低下等不同症状{51。最近研究表明西_9l，HCMV 01， 感染与人类动脉粥样硬化甚至是冠心病的发生有重大关系。有文献资料报道【l 与周围组织相比，不同的肿瘤细胞中HCMV具有较高的发生率，且HCMV感染 可从细胞内部和细胞外部两种途径抑制肿瘤细胞的凋亡，从而导致肿瘤的发生。 因此，如何准确、快速、特异性地监测HCMV的活动性感染从而及时给予患者 相应的抗病毒治疗以及判断预后成为临床上的关键。 1、HCMV的生物学特点[¨“3】 典型的疱疹病毒结构。HCMV呈球形，病毒核衣壳是由162个壳微粒组成的立 体对称的二十面体，核衣壳内部是由双链线性DNA组成的病毒DNA基因组核 重复序列。在核衣壳的周围，包被有脂双层结构的脂蛋白包膜，并包含有编码病 毒的糖蛋白。HCMV的核衣壳包含有超过25种病毒编码的蛋白质。HCMV的自 我复制周期分为三个阶段，即刻早期、早期及晚期。三个阶段中的基因分别为a、 p和Y，所表达的产物分别被称为即刻早期抗原(immediateearlyantigen，IEA)、 早期抗原(earlyantigen，EA)以及晚期抗原(1ateantigen，LA)。其中IEA区位 动复合体，可指导多个基因的表达，而IEA及EA基因的转录与宿主细胞的RNA 多聚酶Ⅱ有关，其表达受靠近启动子的序列调控，调控方式为顺式或反式调控。 2、HCMV的检测 由于HcMV感染可使孕妇、免疫缺陷及器官移植等患者产生严重的不良后 果，因而对于这些人群来说，进行HCMV敏感、快速、特异性的诊断显得尤为 重要。在器官或组织移植术中，HCMV的检测可用于鉴定供体是否为HCMV携 带者；可及早发现患者有无HCMV感染，以便及时接受抗病毒治疗；可早期发 现以及治疗新生儿感染者，对优生优育具有重要意义；此外，HCMV检测还可 以评价各种抗病毒药物的治疗效果，为患者的早日康复提供保障。 2．1细胞培养 细胞培养是最早应用也是最准确的检测HCMV感染的方法。在细胞培养过 程中，样本中含有的病毒接种到细胞中感染细胞，引起细胞病变，从而确定感染 情况。传统的细胞培养方法因时间长而使其应用受到限制，且培养过程中一些化 学添加物质可能对细胞的生长造成不良影响。细胞快速培养技术是病毒感染细胞 后经短时间培养之后用特异性MAbs检测培养细胞中病毒抗原的方法。细胞培养 方法的平均检测时间是9．2天，而快速培养技术的平均检测时间为16．24h。后来 HCMV的早期抗原，并与传统的细胞培养方法进行了对比。作者细胞快速培养 方法在检测HCMV方面具有快速、敏感、特异性强及易于操作等特点。 2．2抗原血症检测 机体感染HCMV之后，可在外周血自细胞中检测到HCMV抗原。抗原血症 检测可用于早期活动性HCMV感染的诊断。临床常用的检测抗原为pp65，pp65 作为一种基质抗原，是一种与患者的临床症状密切相关的敏感性标记抗原，它是 HCMV感染的早期标志物。Erice等¨51认为，在富含多形核白细胞 (polymorphonuclear 血症检测是一种比快速病毒培养检测更敏感的一种方法。作者比较了在PMNL 的血液组分中抗原血症检测方法以及快速病毒培养方法差异。其中，171名患者 共抽取了280份血样，并分别进行传统的病毒培养以及抗原血症检测，抗