介体电化学方法及NADH固有荧光分柝法在细胞代谢活性分析中的正相关性研究.pdfVIP

第十届伞国电分析化学会议论文集 电化学生物传感器与生物电化学分析 D9介体电化学方法及N 细胞代谢活性分析 赵金生，刘继锋 聊城大学化学化工学院，聊城市湖南路1号，聊城，山东，252059 介体电化学方法可用于细胞分析。此时，可在细胞悬浮液中加入合适种类的、浓 度适可的电子媒介体(氧化态)，其还原速率(细胞氧化还原活性)可表示细胞活性 的相对强弱。死亡细胞不具有电化学活性。细胞氧化还原活性的变化表明活体细胞的 生理特征发生了变化。到目前，此方法已被用来分析细胞的多种生理变化，其中包括 代谢活性及细胞毒性分析等。许多有机的电活性物质，如2，6--氯酚靛酚、2，4一苯 醌以及醌的多种衍生物等，这类物质具有足够的疏水性并使之可自由地进出细胞膜， 因此，电子媒介体可从细胞内接收电子，并通过还原态电子媒介体的积累量来表示细 胞的氧化还原活性。此外，两种电子媒介体，确切地说一种有机电子媒介体与一种无 机电子媒介体的结合(例如，2，6一二氯酚靛酚／铁氰化钾)具有协同性，可使电化学 信号大幅度提高。大量的事实表明，电子媒介体是通过与细胞的呼吸链相互作用而接 收电子，而呼吸链的最初电子来源为NADH。NADH是细胞在异化作用(分解代谢)中 产生的，NADH／NADW的转化速率在一定程度上代表了细胞的分解代谢活性。 NADH固有荧光分析法也常用来分析细胞的代谢活性，这基于NADH本身也是一种 重要的荧光物质。在NADH固有荧光分析中，细胞悬浮液在一定的荧光波长条件下被 激发，细胞内的NADH的会发射出另一波长范围的荧光，峰值处的荧光强度与细胞内 的NADH水平成正比。细胞内NADH水平越高，可能说明细胞的分解代谢活性越高。近 年来，NADH固有荧光分析法在细胞代谢分析中的应用也日渐增多。 既然介体电化学方法与NADH固有荧光分析法都可用于细胞代谢分析，那么它们 二者之间必然存在着一定的相关性，但有关这一方面的研究还未见报道。本研究选择 Saccharomycescerevisiae，Pachysolentannophilus,Pichiastipitis等三种酵母作为研究 对象，并分别采用上述两种方法研究它们的分解代谢活性。在介体电化学方法中选择 的电子媒介体为2一甲基一l，4一奈醌／铁氰化钾体系。实验结果表明两种方法在表示三 种酵母的分解代谢活性顺序上具有一致性，即正相关性。虽然两种方法在研究细胞分 284 第十届伞国电分析化学会议论文集 电化学生物传感器与生物电化学分析 解代谢活性方面具有相同之处，但也有不同之处，具体为介体电化学方法表示细胞内 静态水平。恰恰是以上特点使两种方法在研究细胞代谢活性方面具有互补性，本研究 对促进二者的联合应用具有重要的意义。实验数据显示三种细胞的电化学信号分别为 70．00士2．25 nA，61．39士1．76nA，57．18士1．51nA，而NADH固有荧光峰值分别为 1638士25．46 FI，1039士18．67FI，963．4士15．78 FI。实验结果证明两种方法在表示三种酵 母的分解代谢活性顺序上具有一致性，即具有正相关性。 致谢：本工作得到山东省“泰山学者”建设工程的资助。 参考文献： [1】 YS．Torisawa，T．Kaya,Y 54． Chem．，2003，75，21 Part 16． Acta A．，2006，64，3 [3】H．M．Wang，J．Wang，J．Xu，R．X．Cai，Spectrochimica [4】 Matsue，Biosens．Bioelectron．，2005，21，145． 285