共培养海绵微生物诱导抗菌活性物质的研究.pdfVIP

摄建霞门 第三届海洋生物高技术论坛 200s．08．19-23 共培养海绵微生物诱导抗菌活性物质的研究 靳艳郭鹏飞张海涛虞星炬张卫冰 中国科学院大连化学物理研究所海洋生物产品工程组大连116023 摘要：从大连潮间带繁茂膜海绵中分离得到10株放线茵，对各菌进行抗枯草芽孢杆菌活性 检测。结果显示：当各茵单独培养时，10株茵中有3株菌显示抗菌活性；当菌Hp一053与其 余9株菌分别共培养时，9个共培养体系中5个显示出高于单培养的抗菌活性。进一步对部 分共培养发酵液乙酸乙酯提取物进行薄层层析显色分析、生物自显影分析，证明共培养能诱 导海绵相关微生物产生不同于单培养的代谢产物和抗菌活性物质。共培养可能是一条重新开 发利用一些由于无活性或低活性而被忽视的海洋微生物菌种的新途径。 关键词：繁茂膜海绵，海绵相关微生物，共培养，诱导，抗茵活性 海绵是海洋药物和天然产物的重要来源，至今已经从海绵中分离得到大量的抗菌、抗肿 瘤、抗病毒等天然活性物质，是目前最大的海洋天然产物来源…。海绵属于底栖过滤捕食动 物，其独特的摄食、滤食系统使其体内体表富集了大量的微生物。据估计，海绵体内的微生 物群落约占海绵干重的40％左右，比周围海水中微生物含量的高出2个数量级【2】。在一些分 离白海绵的微生物发酵产物中发现了原以为是海绵产生的活性物质，如原认为产自于海绵 Dysidea spongeliae【3]。这说明海绵相关微生物参与这些天然产物的合成或者是它们的真正来源【4j。因 此海绵相关微生物的研究已经逐渐成为海绵天然产物研究的重要部分。 通过方法的改进已从海绵中分离到越来越多的微生物，但是由于环境的改变大部分海绵 相关微生物在纯培养的条件下并不表现出活性，因此海绵相关微生物天然产物的研究仍处于 初级阶段[引，目前迫切需要采用一些新的筛选方法来发现更多结构新颖的天然产物。共培养 是在陆生微生物中已有很多研究基础的方法，通过微生物之间互惠共生或竞争等相互作用m1， J， 微生物共培养可以影响代谢产物的生产。但在海洋微生物的开发中这是一个被忽视的方法u 特别对于海绵这一复杂的微生态体系，微生物间的关系也非常复杂，海绵中分离到的相关微 生物可能更易于在共培养条件下相互影响并产生一些生物活性物质。 繁茂膜海绵产_：=f二我国黄海潮间带，其粗提液表现出较强的抗菌活性，本实验室也已从中 提取到许多有活性的化合物，同时也从该海绵分离得到一些放线菌【8J。本文以10株繁茂膜海 绵的放线菌为研究对象，通过抗菌实验、薄层层析显色和生物自显影等方法，比较单培养和 共培养对菌株代谢产物和活性的影响，研究共培养对海绵相关微生物活性物质的诱导作用。 369 疆建蠢n。 第三屠海洋生物高技术论坛 200s．08．19．23 l材料与方法 1．1菌株来源 perleve)，并在本实验室中 菌株分自大连地区潮间带海域的繁茂膜海绵(Hymeniacidon 纯化后冷冻保存。 1．2菌株初步鉴定 1．1．1 培养特征：通过对各菌在高氏固体培养基上的生长状况(快慢)、气生菌丝、基内菌 丝和可溶性色素的观察，考察菌的培养特征。 1．1．2 分子鉴定：DNA提取参考采用细菌基因组DNA的小量制备方法【9】。经纯化后采用通 用引物进行16S Blast程序与数据库中已有的细菌16SrDNA序列进行相似性比较分析，在属一级水平上确定 菌株的归属。 1．3共培养和单培养 以菌Hp．053为目标菌，其余9种菌分别为共生菌进行共培养实验。单培养为将各菌单 h。 独接5mL种子液于发酵培养基中，摇床单培养108 1．4抗菌活性测定 供试菌株：Bacillussubtilis(10002)，购自国家菌种库。 抗菌活性测定培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂。