巨大芽胞杆菌在油菜根部定殖和促生作用的研究.pdfVIP

∥。 圭兰皇竺曼皇丝些竺一一一．曼查苎丝塑蔓壅堕苎璺堡奎垒塑堡垒!苎塑堂堡壅 巨大芽胞杆菌在油菜根部定殖和促生作用的研究★ 胡小加”，江木兰，张学江 (中国农业科学院油料作物研究所，农业部油料作物遗传改良重点实验室，武汉430062) 在油菜不同根段部位的定殖密度表现从上到下逐渐递减的现象。随着接种后时间的延长而逐渐下降。在根段8cm以外的根区几乎 (2．2×102个／g)。在促生试验中，表现在不同程度上增加植株千重、全氮、全磷和全钾鹊含量。 关键词：巨大芽胞杆菌；A6(gusA)：油菜；定殖 根际是受植物活根影响的微区，是联结植物和土壤的中介，也是微生物最为活跃和丰富的场所。植物促生 根际细菌(Plant rhizobacteria PGPR)由于其应用效果的不稳定性，近30年来，在国内外 growth．promoting 的商品化进程中受到很大程度的限制。造成不稳定性的主要原因是环境因子影响植物促生根际细菌在植物根际 的定殖，定殖不成功就不能有效地发挥其作用{l捌。因此，植物促生根际细菌在植物根际的定殖微生态研究是近 10多年来人们关注的重点。但在15年以前，人们在跟踪和回收引入菌株时，一矗无法将其与同类土著细菌分 开，因而对于引入菌株能否在植物根部或土壤中存活、繁殖并发挥作用知之甚少。随着分子生物学的发展，特 别是基因标记技术的建立与应用，为植物根际细菌定殖微生态学的研究提供了有效手段pI。本研究采用基因标记 技术、缩影系统¨’并结合常规的分析方法，研究植物促生根际细菌～一巨大芽胞杆菌(A6 megaterium)在油菜根际的定殖动态。 l材料与方法 1．1供试土壤和品种 供试土壤取自本所的灰潮土，其基本农化性状为全氮0．8199／kg，P20s2．79／kg，K20 14．39／kg，有机质13．89 a ／kg，pH7．1 供试油菜品种为中油119，由武汉中油阳光种业科技有限责任公司提供。其硫甙和芥酸的含量分别为30H mol／g和1％。 1．2接种物的制备及种子丸衣化 LB液体培养基怿’的250ml三角 挑l环活化的促生菌A6(gusA)(卡那霉素50pg／m1)菌苔置于盛有100ml 衣法按文献16I描述的方法进行。 对无菌缩影系统试验的油菜籽作表藤灭菌，而对于有菌缩影系统的油菜籽未作表面灭菌。 1．3土壤缩影系统的建立 理。所用瓶为罐头瓶，高18cm，直径7cm,使用时用黑纸罩住瓶四周。 土。用无菌塑料压膜纸包住瓶口并用绳扎紧，置28℃培养室催芽。待油菜萌发露出土表后，移至室外，利用自 ★★胡小加(1960．)，男，副研究员，从事油菜掇际微生物研究。 一109一 巨，o争胞杆—r在油薰摄童”匕疽和促J．Ttt用的研究 土壤生物与生蛹分化·掌· 然光照和温度培养。用剪刀在对应油菜部位将封口纸剪十字形小口，以便油菜苗伸出瓶口正常生长。 待油菜主根尖伸长接近瓶底部时(约2周)，将玻璃瓶小心弄破，按无菌操作规程取下油菜营的整个根系于 无菌培养皿内，．同时将另一油菜苗的根系自上而下分为A、B、c三等分，抖掉附着在根上的土粒后，以无菌摄 子和剪刀自下而上分别采取各部位根段并转入对应编号的无菌培养皿内，计根段数并称重。将称重后的根系和 不同部位的根段分别转入盛有20ml 基按MPN法测定细菌数量Ⅳl。试验设3次重复。 gusA基因的检测，按文献I町描述的方法进行，其侵染部位为兰色。 1．4土壤缩影中A6(gusA)在油菜根际的定殖动态 自油菜出苗3d后开始按无菌操作规程取样，以后每隔3d取样1次。取样方法：从子叶下方开始，抖掉附 着在根上的土粒后，以每2cm根长为一段剪