微流控芯片实验室用于分子和细胞水平的临床检验与药物筛选.pdfVIP

2006年11月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 微流控芯片实验室用于分子和细胞水平的l艋床检验与药物筛选 林炳承‘，秦建华 (中国科学院大连化学物理研究所，大连116023) 芯片管壁涂层修饰方法。设计研制了8台分别具有激光诱导荧光、紫外、电化学和化学发光等不 同检测功能的微流控芯片装置和芯片-质谱接口。实现了双十字交叉芯片上样、整体柱亲和、酶 反应、固相萃取(SPE)、PCR反应、膜分离、电泳分离、细胞培养、单细胞分析等单元操作， 研制成微阀和微泵，实现了各种单元操作在芯片上的集成或规模集成。 按全集成DNA分析微流控芯片的要求，研制出芯片SPE，用于对自培养细胞和人全血样品 进行纯化，平均萃取效率大于80％，得到的DNA已直接通入芯片PCR和芯片电泳：与此同时， 以大量的临床实际样品为对象，以病原体基因检测、基因分型和基因突变检测为基本途径，验证 了微流控芯片进行基因诊断和遗传多态性分析的可行性。开展了严重急性呼吸系统综合征(SARS) 病毒、高血压易感基因、以及肿瘤相关基因(P16基因)甲基化等临床样品的规模检测。 在蛋白，特别是糖蛋白中的糖链结构和糖型分析的基础上，制备了基于微泵、微阀控制，用 于夹心免疫分析的微流控芯片。芯片由三层组成：最上层为蚀刻有微流控通道的玻璃，中间为 道， 144个阀，可同时进行18个样品的检测，包括混合、竞争反应、洗涤、催化等在内的整体 灵敏度低于lng／mL。整个芯片制备工艺简单，适合规模化生产(图1)。 以药物诱导肿瘤细胞凋亡为模型，采用多层软蚀刻技术，建立了一套集成化微流控芯片系统， 用于对细胞凋亡关键事件的研究。该芯片充分利用微尺度下芯片通道内的层流混合、分流特征， 结合已有的关于芯片浓度梯度生成器的研究工作，将多种药物浓度生成、细胞培养、细胞受激、 细胞标记及多种细胞响应检测的过程集成在芯片上，实现了对阿霉素(DOX)诱导肝癌细胞 (HepG2)凋亡过程的监测(图2)。 图l微流控免疫芯片 图2微流控药物筛选芯片 aI微泵驱动免疫芯片b．微泵驱动免疫芯片 扎集成化微流控芯片b．微培养室细胞荧光检测结果 e．PDMS．玻璃药物筛选芯片 c．18通道免疫检测50ng／rnLhlgG(LIF,峰高RSD=3．5％) ’通讯联系人 33 2006年i1月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 以三氧化二砷诱导急性早幼粒白血病细胞(NB4)凋亡为模型，实现了对凋亡NB4细胞中氧化 还原状态的监测。在此基础上，研制出细胞内还原型谷胱甘肽药物敏感性专用芯片。该芯片不仅 提供了活细胞微阵列，并且将细胞种植、培养、自动浓度梯度药物处理、标记和药物．细胞作用 集成在一起。研究结果显示：细胞内还原型谷胱甘肽的水平与乳腺癌细胞的耐药相关，通过药物 处理消耗细胞内还原型谷胱甘肽能够提高药物敏感性。 参考文献： 【1]林炳承，秦建华．微流控芯片实验室(第一版)，科学出版社，2006． 【2]2 Xiaomian Liu，Runtao Wu，Hui Du, Zhou，Dayu Zhong，ZhongpengDai，DapengWang，Yuguang Zhinan Xia,LipingZhang，XiaodanMei，Bingcheng 7)， 3032—3039． 【3]XiuliMao，Yong Dai，Keyi Luo，ZhongpengWang，YuguangDu，Bingcheng 1-6947+ Chemistry,2004，76(23)：694 Luo，Xiaomian 【4】DapengWu，Yong Zhou，ZhongpengDai，