流式细胞计量术在临床医学中的应用.pdfVIP

内蒙古医学院学报 2003年3月 第25卷 第1期 ·55· · 博士论坛 · 文章编号：1004—2113(2o03)O1一o055一O6 流式细胞计量术在临床医学中的应用 吴 岩，毕力夫 (内蒙古医学院 基础部组胚教研室，内蒙古 呼和浩特 010059) 近年来，流式细胞计量术(flow cytometry，FCM)在细胞生物学、分子生物学、免疫学、血液学及肿瘤学等学 科领域中已经得到了广泛的应用。下面介绍FCM 在细胞周期分析、细胞凋亡分析、核型分析、多价耐药性检测、 免疫细胞分型分选、血液病的免疫分型、肿瘤细胞监测、机体免疫状态监测等方面研究中的应用。 关键词：流式细胞计量术；应用 中图分类号：Q一3 文献标识码：A 量直方图分为三部分，即G。／G。、S、G：／M期三个 1 流式细胞计量术在细胞生物学及分子生物学研 峰。G。／G。和G：／M细胞峰DNA的含量呈正态分 究中的应用 布，s期细胞峰则是一个加宽的正态分布。这种 目前在细胞生物学及分子生物学研究 中， DNA图形的分析主要有两个方面作用：一是通过 FCM主要用于细胞周期分析、细胞凋亡和染色体 分析DNA倍体含量可鉴别良性和恶性肿瘤。良性 核型分析。 肿瘤或良性增生不会出现非整倍体，而恶性肿瘤则 1．1 DNA倍体与细胞周期分析 可出现；二是判断恶性肿瘤病人的预后和治疗效 1．1．1 DNA倍体与细胞周期分析原理 在生物 果。 细胞核中，DNA含量并非恒定，随细胞增殖周期时 1．1．2 DNA含量的表达方法及倍体判断 FCM 相不同而发生变化。G。期细胞是不参与增殖周期 定量分析一细胞群体时，DNA含量一般以DNA 循环的静止期细胞，DNA含量为恒定的二倍体 指数(DNA index；DI)表示相对DNA含量。 (2C)；G。期细胞具有增殖活性，开始有 RNA合 r、 样品G。／G。期细胞峰平均荧光道数 一 成，但DNA含量仍为2C，与G。期细胞DNA含量 正常二倍体标准细胞G。／G。细胞峰平均荧光道数 DNA倍体的判断是根据所测细胞群体DNA 相同；当细胞进入s期后，DNA含量逐渐增加，从 2C--~4C(四倍体)变化到细胞DNA含量倍增结束， 含量分布直方图G。／G。峰的DNA相对含量值，即 进入G：期，最终进入M期；在M期分裂成两个子 DI进行判定的。从理论上讲，二倍体细胞的DI值 细胞之前，G：期和M期细胞的DNA含量均为恒 应为1．0，四倍体细胞的DI值应为 2．0，但实测 定的4C。DNA染色时，荧光染料(如PI)与细胞 DNA含量直方图的G。／G。峰为正态分布，测定过 DNA分子特异性结合，而且有一定的量效关系，即 程存在一定漂移。为精确解释这种漂移现象，在 DNA含量的多少与荧光染料结合成正比，荧光脉 FCM 分 析 DNA 含量 中 引入 了变 异 系数 冲与直方图的通道数成正比。因此，FCM分析一个 (coefficient of variation，CV)值。实测结果的CV 群体细胞峰DNA倍体与细胞周期时，将DNA含