无选择标记的LFY基因植物表达载体的构建.pdfVIP

懿瓣鬻糍镱攀i篱 无选择标记的LFY基因植物表达载体的构建‘ 孙磊张启翔① (北京林业大学园林学院，国家花卉工程技术研究中心，北京100083) 摘要用PCR方法从克隆载体上扩增出LFY基因并在两端添加XhoI酶切位点，将其连接在用XhoI切除了潮 5’和LFY基因3’设计引物，PCR检测目的片断的插人及其方向。 关键词无标记；LFY基因；表达载体 A on Marker-free Vector StudyConstructing Expression ofLFYGeneforP1antGeneticTransformation SUNLeiZHANG Qi—xiang (NationalFlower Architecture EngineeringTechnology‰ecocho，脚。CollegeofLandscape Be《吨ForestryUniters铆，8嘶啦!000831 XhoI wstsalso AlmtrtLFY WaS PCRmethodfromclonevectorandthe site added．The gene amplifiedby enzyme acquired to onwhich wsB Xh01．Andthereforethemarker-freeex· genew∞ligatedpl∞rnidpCAMBIAl301hygromyeingene digestedby of w8．8 andreward hlll5’borderofCaMV35S vector constructed．Forwardn妇口weredesigned pin．ion I“gene promoter and3’borderofLFYTheaimed maditsdirectionwemidentifiedPCR sequence by words vector Key Marker—free；坍gene：Expression 随着分子遗传学和现代生物技术的迅猛发展，转 供选择的标记基因种类非常有限，妨碍多次重复转 基因技术日渐成熟．应用遗传工程将有经济价值的外 化u一；(3)标记基因的存在使转基因作物的安全性 源基因整合进人受体细胞的基因组内，并得到有效表 评价需要长期的过程，增加转基因作物商品化的成 达，以实现定向改良植物性状，获得植物新品种已成 本”o。因此，获得无选择标记的转基因植株已成为植 为植物育种研究的热点。但是，一方面转基因育种具 有很多传统育种方法不可比拟的优点，另一方面，其 野生型拟南芥中克隆了一个与调控花分生组织启动相 自身也存在一些限制因素。目前植物遗传转化中多采 关的基因双链——Le由(简称LFY)基因，该基因 用选择标记基因才能筛选转化体，如卡那霉素、潮霉 的突变体使花序分生组织向花分生组织的转变受阻。 素，或除草剂抗性的基因如草甘磷。这些选择标记基 1995年，他们又将该基因导人杨树，结果使原本需 因的引入大大提高了选择转化子的准确性，但使用选 要8年才能开花的杨树品种