栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒cDNA文库的构建及部分序列分析.pdf

福建覆n’ 第三届海洋生物高技术论坛 200s．08．19-23 栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒cDNA文库的构建 及部分序列分析 王崇明1，艾海新1’2，刘英杰3，王秀华1，李赞2，宋微波2 (1．中国水产科学研究院黄海水产研究所，山东青岛266071； 2．中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室，山东青岛266003； 00039) 3．中国水产科学研究院，北京1 摘要： VirusNecrobiotic 坏死症病毒(Acute 18质粒 II反转录酶合成cDNA，并克隆于pUCl 机引物和Oligo(dT)双引物法，SuperScript 上，利用蓝白斑筛选阳性克隆子，PCR法快速鉴定重组质粒。经筛选得到2个阳性克隆23”、 52#，插入片段大小约为1 未有类似的序列报道，提示该病毒可能为一种新发现的病毒。 关键词： 栉孔扇贝，急性病毒性坏死病毒， cDNA文库，克隆，序列分析 海的山东半岛和辽东半岛，为沿海地区主要的支柱性产业。白1997年起，连续几年爆发的“大 规模死亡症”导致了该产业的巨大损失【I。2】。作者所在的课题组自2000年起在山东半岛栉孔扇 贝土要养殖海Ⅸ对导致“大规模死亡症”的各种可能诱因，分别从流行病学、病理学、病原学 以及环境理化、生物吲子等力‘面开展了深入、全面的研究与调查。结果明确证实一种I斟A 球形病毒是导致“大规模死亡症”|，|勺赢接病原[3。6】。宋微波等将该病症定名为“急性病毒性坏死 ViralNecrobiotic 症”(Acute Disease，AVND)17]。 0’… 目前幽内针对一些水产动物病毒，已成功构建了部分基因组的cDNA文库，如田静等[1 构建了草鱼出血病病毒基吲组和部分基闪片段的cDNA文库：张叔勇掣眩]构建了中华绒螯蟹 呼肠弧病毒RNAll’内cDNA文库；宋晓玲等【l3】构建了1000余株对虾感染WSSV后期鳃细胞 的重组cDNA克隆。但贝类病毒类似研究尚未见相关|，|勺报道。本研究对AVNV基测组进行了 cDNA合成、克隆以及部分克隆的序列分析，以期为进一步探索该病毒的分子生物学性质， 建立该病毒核酸诊断技术奠定基础。 l材料与方法 1．1 实验材料 具典型发病症状的栉孔扇贝(壳高4．5～6．5cm)，J：2003年7月采自山东省青岛市中国 海洋大学太平角实验基地。 622 福建凌仃 第三届海洋生物高技术抡坛 2005．08．19-23 1．2试剂与仪器 1 Marker： 8质粒、感受态细胞JMl09、DNA 限制性内切酶、RNase、DNase、pUCl 000、2000 III DL2000(分子量梯度为：100、250、500、750、1 bp)、九-Hinddigest(分子量梯 322、4 027、2 361、6557、9416、23 度为：125、564、2 130bp)购自宝生物工程(大连)有 Choice forcDNA 限公司。TRIZOL试剂、SuperScriptx