牙鲆MHCⅡB基因多态性及其与鱼体抗病力关系的研究.pdf

接毽覆n 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19-23 牙鲆MHCIIB基因多态性及其与鱼体抗病力关系的研究1 陈松林¨张玉喜k6 (a中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071) (b中国海洋大学海洋生命学院青岛266003) 的3’末端非编码区。序列比对表明牙鲆与丽鱼、真鲷、鲈鱼MHCIIB的氨基酸序列具有较 高的同源性；而与虹鳟、大西洋鲑、鲤鱼、斑马鱼的同源性较低，与人、鼠和鲨鱼MHCIIB II 的同源性最低。组织表达研究表明，牙鲆MHCB在正常牙鲆组织中为构成型表达，但表达 量在各个组织中不同，其中在鳃、肝、心脏、血、脾和头肾中的表达量较高，在肾、皮肤、 从42个感病个体和42个抗病个体的基因组DNA中扩增，扩增产物长度为2681280bp。在 268／280 classII 克隆的测序结果，发现有13个不同的MHC D等位基因，并且分别编码13个不同的 氨基酸序列。其中大部分等位基因如仉b，C，吐e，，工幺f，m是两个群体共有的，其中等位基因 d在感病群体中出现的频率显著高于抗病群体中出现的频率。而等位基因g和h只出现在抗 病个体中，其频率分别为21．4％和9．52％；等位基因z只出现在感病群体中，其频率为 19．05％。对核苷酸替代的类型及位点进行分析，发现非多态结合位点的非同义碱基替代率与 替换集中出现在多态结合位点上。 关键词：主要组织相容性复合体；cDNA；组织特异性表达；多态性；抗病力；日本牙鲆； olivaceus Paralichthys 主要组织相容性复合体(MHC)基因编码细胞表面糖蛋白，编码的糖蛋白能与抗原多肽 结合，通过与T细胞的相互作用，形成一个三元复合体，诱导和调节机体的免疫应答，激发 机体特异性免疫反应。一般来说，鱼类的MHCI类分子结构和哺乳动物相似，是由a链和p2一 微球蛋白非共价连接形成的异二聚体。鱼类的MHCII类分子是由C【链和B链组成的异二聚 et 体。自1990年，Hashimotoal在硬骨鱼．鲤鱼中第一次报道了MHC基凶至今，几乎对所有 0【、II 脊椎动物的MHC口、11D基因进行了研究，如软骨鱼[1，2】、硬骨鱼【3，4，5，6】、两栖类 系统，存在大量的基凶座位，每个基因座位都存在着大量的等位基因，这种多态性导致了每 个个体都能结合和呈递相当数量的与免疫反应有直接功能相关性的多肽，其中多态性位点主 1 国家863计划(2002AA626010)和973计划(2004CBll7403)项目资助 24通讯作者。E-mail：chensl@ystN．ac．cn。 483 覆建凌n 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19-23 要在外显子2上。MHC基因在免疫反应中起着重要的作用，而且特殊的MHC等位基冈与抗 都有过相关报道。 olivaceus)在我国俗称牙片、偏口、比目鱼，是名贵的海产鱼类，也 牙鲆(Paralichthys 是我国黄、渤海适于发展养殖J!|勺优良品种之一。目前在水产养殖中，高密度集约化养殖增加 了病原微生物感染和疾病暴发的机会，给养殖生产带来巨大危害。为了控制疾病的发生，筛 选抗病相关功能基测和基因标记，培育抗病优良品种显得极为重要。 列和由此推测的氨基酸序列进行了分析，同时比较了它与其它鱼类、鼠和人的MHCIIB的氨 基酸序列，并分析了牙鲆MHCIIB基l矧的多态性及其与抗病力的关系，为进一步研究MHCII 类分子的作用机理及筛选抗病相关基因标记奠定了基础。 l材料与方法 1．1实验材料 牙鲆购自青岛市水产品市场，于麦岛养殖基地暂养一周，用鳗弧菌(Vibrio