硝呋烯腙的纯化及其在饲料中的HPLC及LCMS检测技术研究.pdfVIP

第25卷增刊 分析测试学报 V01．25 FENXICESHI ofInstrumental NOV．2006 2006年11月 XUEBAO(JournalAnalysis) 硝呋烯腙的纯化及其在饲料中的HPLC及 LC—MS检测技术研究 王金荣1，李德发2，张丽英2 代中期发现的一种新型抗生素，作为生长促进剂和抗菌剂广泛用于猪、禽和牛上，一般的添加剂量为 10一30 ms／kg。近年来随着人们对动物食品安全的关心，尤其是对动物产品中抗生素残留的关注，我 国农业部于2002年的193号文件明令规定禁止使用硝呋烯腙于食品源性动物。 1 实验部分 1．1 主要仪器 4．0” Waters高效液相色谱仪：Alliance2690，2487紫外检测器，MicromassZQ质谱仪及“MassLynxTM EA 数据处理系统；TU一1901型紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)；元素分析仪(Flash1112， 意大利Carlo-Erba公司)；KLSl2型氮吹仪-数显式电热恒温水浴(北京康林科技有限责任公司)。 1．2样品处理 称取0．25—5 g饲料样品于50mL带有盖子的离心管中，加入40mL样品提取溶液，在微型涡旋振 500 荡器上振荡混匀后再振荡提取30rain，3r／min离心10min，上清液倾入100mL棕色容量瓶中，再 分别用20 mL mL提取剂重复提取2次，离心后的上清液合并到100mL容量瓶中并定容。吸取l一2 (含大约0．2—1．0mg／L的硝呋烯腙)上述溶液于10mL离心管内，在65。C水浴的氮吹仪中浓缩(残 余体积不少于100止)。注意不要蒸干，否则回收率会降低。浓缩后的样品管中加入2mL样品溶解 液，涡旋振荡振摇2min后超声1min，待用。 mL 采用固相萃取小柱Oasis@HLB(美国Waters公司)对样品进行净化。分别用lmL超纯水和l mL 甲醇活化小柱，装载样品，在自然状态下或用固相萃取仪控制流速大约1滴／s，分别用l 10％的甲 mL 醇溶液淋洗3次，最后用2 5％N，N一二甲基甲酰胺的甲醇溶液洗脱。洗脱液收集到10mL离心管 中，在65℃水浴中氮气吹至近干，最后用甲醇定容体积为lmL，室温下避光保存，待上机测定。 2 结果与讨论 硝呋烯腙属于国家禁止使用的药品，其标准品很难购买。本实验在多次实验了乙醇、乙二醇单甲 醚、l，4一二氧六环、二甲基亚砜、N，N-二甲基甲酰胺等多种溶剂的基础上，比较了这几种溶剂对硝 呋烯腙在常温及加热条件下的溶解度、结晶状态及与溶剂的分离情况等，最终选用乙二醇单甲醚作为 纯化的溶剂。经过3次重结晶后所得到的样品，经元素分析仪测定的结果为碳、氢和氮的含量分别为 的99．86％。并经核磁共振波谱仪、紫外分光光度计、液相色谱、液相色谱一质谱联用仪等一系列的 分析和测试表明纯化后的硝呋烯腙可以用作本实验的标准品。 实验采用N，N-二甲基甲酰胺、甲醇和乙腈的混合物来提取饲料中的硝呋烯腙，随着3种溶液的比 例不同萃取效率也不同，仅用甲醇或乙腈时回收率较低，当N，N一二甲基甲酰胺、甲醇和乙腈的体积 比为50：25：25时提取效果最佳。提取后的样品溶液用复合型反相c。。固相萃取小柱进行净化，可以除 去基质中大部分干扰物质，在硝呋烯腙色谱峰附近没有干扰峰出现。在使用SPE净化样