课题2土壤中分解尿素的细菌(答案版).docVIP

专题2 微生物的培养与应用 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．尿素（分子式 CO(NH2)2 ）是一种重要的氮肥，农作物 不能 （能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为 氨（CO2） 。能分解尿素的细菌能合成 脲酶 。 2.选择培养基是指允许 特定种类的微生物 生长而同时抑制或阻止 其他种类微生物生长 生长的培养基。 选择培养基的选择性条件（限制性条件）包括 营养、温度、Ph 等。 举一反三 写出分离出下列微生物的选择性条件 将土壤中的固氮菌分离出来 不加氮源的培养基 将土壤中自养微生物分离出来 不加碳源的培养基 筛选出抗青霉素的微生物 加入青霉素的培养基 筛选出耐高浓度食盐的微生物 加入高浓度的氯化钠 3.在统计菌落数目时常用 显微镜直接计数法或稀释涂布平板法 细菌的数量还可以 滤膜 法计数。 4.当 稀释度足够高 时，培养基上的一个标准菌落来源于 稀释液中的一个活菌 。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30-300 的平板进行计数。 5.每克样品细菌数＝ （C/V）×M （C菌落平均数，V涂布稀释液的体积，M代表稀释倍数） 。 6.菌落数往往比活菌数 少 ，原因是当2个或多个细菌连在一起时只形成 一个 菌落。 7.土壤微生物主要分布在距地表 3-8 cm 8.分离不同的微生物采用不同的稀释倍数，其中细菌为 104、105、106 倍，放线菌为 103、104、105 倍，真菌为 102、103、104 倍。培养不同微生物需要不同温度，其中细菌一般在 30-37 ℃培养，放线菌一般在 25-28 ℃培养，霉菌一般在 25-28 ℃培养。 9.在菌落计数时每隔 24 h统计一次菌落数目，选取 菌落数目稳定 时的记录作为结果。 在一定条件下同种微生物表现出稳定的 菌落特征 ，包括 菌落的形状、大小、隆起的程度、颜色 等，是区分菌种的主要依据。 10.对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助 生物化学 的方法。例如：在尿素培养基中加入 酚红 指示剂，若培养基变 红 ，说明细菌能分解尿素；大肠杆菌在 固体 培养基上培养，加入 伊红-美蓝 菌落呈现 黑 色。 鉴别培养基：在培养基中加入 化学物质或指示剂 ，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物。 课题3 纤维素分解微生物的分离 1 2． 棉花 是自然界中纤维素含量最高的天然产物。纤维素在 纤维素酶 酶的催化作用分解。 ? C1酶、CX酶 和葡萄糖苷酶 3.刚果红与纤维素形成 红色复合物 ，当纤维素被 纤维素酶 分解后，红色复合物无法形成，出现以 纤维素分解菌 为中心的 透明圈 ，我们可以通过 是否产生透明圈 来筛选纤维素分解菌。 4.实验流程 选择培养、梯度稀释、将样品涂布在鉴别纤维素分解菌的培养基上、筛选产生透明圈的菌落 纤维素分解菌选择培养基属于 液体 （液体、固体）培养基。 纤维素分解菌鉴别培养基属于 固体 （液体、固体）培养基。 5.刚果红染色法 染色法 优点 缺点 方法一 颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作繁琐 刚果红会使菌落之间发生混杂 方法二 操作简便不存在菌落混杂问题 1.产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈 2.有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。 6.为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行 发酵产纤维素酶 实验，纤维素酶的发酵方法有 液体 发酵和 固体 发酵两种。 7.纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素产生的 葡萄糖 含量进行定量测定。 8.填表比较 比较项目 分解尿素的细菌 纤维素分解菌 选 择 培 养 基 原理 将细菌涂布在只有 尿素做氮源的选择 培养基上 将细菌涂布在只有 纤维素粉做碳源的 选择培养基上 培养基类型 固体培养基 液体培养基 目的 筛选菌株 选择培养 鉴 定 培 养 基 原理 在细菌分解尿素的化学反应 中，细菌合成的脲酶将尿素 分解成了氨，氨会使培养基 的碱性增强，pH升高。在培 养基中加入酚红指示剂，如 果pH升高指示剂会变红 刚果红可以与纤维素形成 红色复合物，当纤维素被 纤维素酶催化分解后红色 复合物无法形成，培养基 上就会出现以纤维素分解 菌为中心的透明圈 现象 观察菌落周围是否有着色的 环带出现来鉴定尿素分解菌 观察菌落周围是否出现 透明圈来筛选纤维素分解菌 方法 脲酶检测法 刚果红染色法