免疫学检测-2013.pptVIP

免疫学诊断 体外抗原或抗体检测 抗原抗体反应的原理 抗原或抗体的检测方法 抗原抗体反应的原理 特异性:一种抗原只能和它刺激所产生的抗体结合。 非共价的可逆结合 亲和力/亲合力 一抗，二抗 可见性：当抗原抗体比例恰当时形成肉眼可见的沉淀物。 抗原或抗体的检测方法 凝集反应(agglutination) 颗粒性抗原与抗体结合 沉淀反应(precipitation) 可溶性抗原与抗体结合 单向免疫扩散 双向免疫扩散 免疫电泳 抗原或抗体的检测方法 采用标记物的抗原抗体反应标记物包括:荧光素/酶/放射性核素等 免疫荧光法 酶免测定: ELISA(酶联免疫吸附试验) ELISPOT(酶联免疫斑点试验) 放射免疫分析 免疫组织化学 利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。 外周血单个核细胞（PBMC）的分离 淋巴细胞的纯化 外周血淋巴细胞的选择性分离 免疫荧光 流式细胞术 磁珠分离法 四聚体技术 T细胞增殖实验 细胞毒实验 细胞因子检测 B细胞增殖实验 免疫检测的应用 疾病的诊断 免疫学监测 凝集反应 Systemic Lupus Erythematosus 常用的荧光素有异硫氰酸荧光素，藻红蛋白，镧系稀土金属等。 免疫荧光技术的特点： 特异性与形态学相结合 应用范围广 可定位，如免疫组织化学 缺点：荧光易消退，难于保存，本底干扰大 酶 放射性核素 生物素(biotin,B) 广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取; 在机体内以辅酶形式参与各种羧化酶反应，又称辅酶R、维生素H. 亲和素(avidin, A) 一种碱性糖蛋白，耐热并耐受多种蛋白水解酶的作用，和生物素结合后十分稳定; 亲和素由4个相同的亚基组成，能结合4个分子的生物素; 二者结合力极强,具有高度特异性和稳定性。 放射性核素能自发地放射出射线。利用高灵敏度的仪器能进行定量、定位、定性探测。动态观察各种物质在生物体内的量变规律。 * * 吴敏昊 中山大学免疫学教研室 淋巴细胞分离技术 淋巴细胞的类型鉴定和分离 淋巴细胞的数量和功能测定 亲和力(Affinity)与亲合力(Avidity) Affinity Avidity Avidity Ag过量 Ab过量 比例适当 Immunofluorescent detection of antinuclear antibody in the serum of an SLE patient ELISPOT 原理 Ab包被培养孔 加入淋巴细胞及培养液 细胞分泌的细胞因子与Ab结合 ELISPOT 原理 加入酶底物显色形成斑点 洗除细胞，加入生物素标记的抗细胞因子抗体及酶标抗生物素抗体 结果观察 荧光素 先将已知的Ab或Ag结合在某种固相载体上，并保持其免疫活性。测定时，将待检标本和酶标Ag或Ab按不同步骤与固相载体表面吸附的Ab或Ag发生反应，用洗涤的方法分离Ag、Ab复合物和游离成分，然后加入酶的作用底物催化显色，进行定性或定量测定。 常用的有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶等。