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CRISPRCas9切割痘病毒DNA抑制病毒复制
中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2016, 38(4): 405–412 DOI: 10.11844/cjcb.2016.04.0044
CRISPR/Cas9切割痘病毒DNA抑制病毒复制
1 1 2 2 1,2 3*
王娇娇 张新敏 倪爱民 章康健 刘新垣 刘锡君
1 2
( 浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所, 杭州 310018; 中国科学院上海生命科学研究院生物化
学与细胞生物学研究所, 上海 200031; 3 同济大学附属第十人民医院泛血管疾病研究所, 上海 200072)
摘要 当前, CRISPR/Cas9 系统靶向痘苗病毒的相关研究鲜有报道。该文采用了CRISPR/
EGFP
Cas9基因组定点编辑技术, 以痘病毒为研究对象。在重组痘病毒WR-EGFP 中针对 基因序列
设计不同靶点gRNAs, 转染Cas9/gRNA质粒, 同时感染WR-EGFP痘病毒, 随后观察EGFP 荧光表达、
提取病毒基因组, 通过PCR进行切口鉴定并运用错配酶切法验证CRISPR/Cas9对痘病毒靶点DNA
切割的切口修复情况。与单独感染WR-EGFP组相比, 转染了Cas9/gRNA174和Cas9/gRNA175质粒
的EGFP荧光强度明显降低, 表明CRISPR/Cas9抑制WR-EGFP病毒中EGFP基因的表达。相对定量
PCR及错配酶切实验结果显示, CRISPR/Cas9切割靶点导致WR-EGFP病毒基因组产生了切口, 并且
存在DNA错配修复现象。最后, 通过结晶紫染色法测定痘病毒的滴度, 结果显示, 经CRISPR/Cas9
处理组的痘病毒滴度显著下降, 即CRISPR/Cas9能够使痘病毒的复制能力显著地降低。综上所述,
CRISPR/Cas9切割痘病毒基因组DNA并且抑制痘病毒复制。
关键词 CRISPR/Cas9; 痘病毒; 靶向切割; 病毒复制
CRISPR/Cas9 Cleavage of Viral DNA Efficiently Suppresses Vaccinia Viruses
1 1 2 2 1,2 3 *
Wang Jiaojiao , Zhang Xinmin , Ni Aiming , Zhang Kangjian , Liu Xinyuan , Liu Xijun
1
( Xin Yuan Institute of Medicine and Biotechnology, College of Life Sciences, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018, China ;
2Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai
3
200031, China; Institute of Pan-vas
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