里氏木霉β-木糖苷酶的分离纯化、酶学性质及水解机理研究.pdf

第47卷第 1期 生 物 质 化 学 工 程 Vo1．47No．1 2013年 1月 BiomassChemicalEngineering Jan．20l3 doi：10．3969／j．issn．1673-5854．2013．O1．004 · 研究报告—— 生物质化学品 · 里氏木霉 一木糖苷酶的分离纯化、 酶学性质及水解机理研究 江小华，朱均均，余世袁，勇强 (南京林业大学化学工程学院，江苏 南京 210037) 摘 要：通过硫酸铵沉淀、超滤脱盐、离子交换层析 、凝胶过滤层析等手段 ，从里氏木霉(Trichodermareesei)RutC-30木聚 糖酶粗酶液中分离纯化得到分子质量 ll0．8ku、比活力为61．99IU／mg的电泳纯p一木糖苷酶。酶学性质研究结果表明： 该酶反应以温度60℃、pH值3．5为宜，在60oC以下、pH值3．0—8．0酶活性稳定，且该酶作用于对硝基苯基一t3-O-木 糖苷的 值和 值分别为O．29i~mol／mL和 169．99IU／mg。酶水解机理研究结果表明，该酶从低聚木糖的非还原性 末端切断口一l，4一糖苷键释放出木糖，其最适作用底物是短链的低聚木糖，随着低聚木糖碳链 的增长，酶作用效率逐渐下 降，而对木聚糖几乎不降解。 关键词 ：里氏木霉；口一木糖苷酶；分离纯化；酶水解 中图分类号：TQ35 文献标识码：A 文章编号：1673-5854(2013)01—0027—06 Purification，CharacterizationandHydrolysisMechnaismofJB—Xylosidase trom 1，介n ‘加T ，r7n0 n 一e0 JIANGXiao-hua，ZHUJun-jun，YUShi—yuan，YONGQiang (CollegeofChemicalEngineering，NamingForestryUniversity，Nanjing210037，China) Abstract：Usingammonium sulfateprecipitation，uhrafihrationdesalination，ion—exchangeandgelfdtrationcolumnchromatogra— phy，a口一xylosidasewithmolecularweightof110．8kuandspecificactivityof61．99IU／mgwaspurifiedtohomogeneityfrom cul。 turexylanasesolutionofTr／chodeⅣ·m reeseiRutC一30．Resultsofenzymaticpropertiesshowedthattheoptimalreactioncondition oftheenzymewas：pH valueof3．5；reactiontemperatureof60 ℃ ．Theenzymewasstablebelow 60oC andpH valueranges rfom 3．0 to8．0．IthadaKmvalueof0．29ixmol／mLandVm valueof169．99IU／mgbyusingP—nitrophenyl 一D-xylopyranoside as thesubstrate．Resultsofenzymatichydrolysismechanism indicatedthat8一xylosidasereleasedxylosefrom non—reducingendsof xyloolosaccharidesbycuttingoffJB-1，4-glycosidicbond．Theoptimumsubstrateoft3一xylosidasewasshort—chainxyl0oligosaccha- tides．Withchainlengthofxylooligosaccharidesincreased，th