基于DNA链置换反应的新型固定化酶反应器制备及应用.PDFVIP

２０１７年 ３月 Ｖｏｌ．３５ Ｎｏ．３ Ｍａｒｃｈ ２０１７ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ２６０～２６３ 庆祝 ２０１７年国际劳动妇女节色谱行业女学者专刊·研究快报 ＤＯＩ： １０．３７２４ ／ ＳＰ．Ｊ．１１２３．２０１６．１００２３ ?收稿日期：２０１６?１０?０９ ?通讯联系人．Ｔｅｌ：（０１０Ｅ?ｍａｉｌ：ｙａｎｇｙｉ＠ｍａｉｌ．ｂｕｃｔ．ｅｄｕ．ｃｎ． 基金项目：国家自然科学基金项目 ． Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｉｔｅｍ： Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ （Ｎｏ． ． 基于 ＤＮＡ链置换反应的新型固定化酶反应器制备及应用 宋佳一，　 苏　 萍，　 杨　 烨，　 杨　 屹? （北京化工大学理学院， 北京 １０００２９） 摘要：建立了一种新型的酶固定化方法，采用 ＤＮＡ链置换反应成功地在单链 ＤＮＡ 标记的磁性纳米粒子上实现了 酶的链置换无损更替。 该技术可实现目标酶的再利用，节约了生产成本。 制备的固定化胰蛋白酶微反应器具有较 好的重复利用性和高酶切效率，重复使用 １０次后仍可保持原酶活性的 ８６％；利用链置换反应制备的 ＭＮＰｓ＠ ＤＮＡ? Ｔｒｙｐｓｉｎ酶切马心肌红蛋白 ５ ｍｉｎ后，即可获得９５％ ±０％ （ｎ＝ ３）的氨基酸序列覆盖率，远超过相同条件下自由酶酶 切 １２ ｈ的结果。 实验表明，发展的固定化酶技术具有高磁响应性，便于从反应体系中回收固定化酶和重复使用，同 时此技术可显著提高酶活性，因此可用于固定各种重要的酶，同时可将其广泛应用于各种酶促反应中。 关键词：ＤＮＡ链置换反应；固定化酶；酶切；高效液相色谱；质谱 中图分类号：Ｏ６５８　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 文章编号：１０００?８７１３（２０１７）０３?０２６０?０４ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｅｎｚｙｍｅ ｒｅａｃｔｏｒ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＤＮＡ ｓｔｒａｎｄ ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ＳＯＮＧ Ｊｉａｙｉ， ＳＵ Ｐｉｎｇ， ＹＡＮＧ Ｙｅ， ＹＡＮＧ Ｙｉ? （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２９， Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａ ｎｏｖｅｌ ｅｎｚｙｍｅ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ． Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ｗａｓ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｕｓｉｎｇ ｓｉｎｇｌｅ?ｓｔｒａｎｄｅｄ ＤＮＡ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｓ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ＤＮＡ ｓｔｒａｎｄ ｄｉｓ? ｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ． Ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ （ＡＬＰ） ｗａｓ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ｐａｒｔｌｙ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｃａｐｔｕｒｅ ＤＮＡ?ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ （ＭＮＰｓ＠ ｃａｐＤＮＡ） ｂｙ ｈｉｇｈｌｙ ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｗａｔｓｏｎ?Ｃｒｉｃｋ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｔｈｅ ＭＮＰｓ＠ ＤＮＡ?ＡＬＰ． Ｆｏｒ ｔｒｙｐｓｉｎ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ， ｔｈｅ ＭＮＰｓ＠ ＤＮＡ? Ｔｒｙｐｓｉｎ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＮＰｓ＠ ＤＮＡ?ＡＬＰ ｗｉｔｈ ｔｒｙｐｓｉｎ?ｔａｒｇｅｔ ＤＮＡ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｔｏ ｔｒｉｇｇｅｒ ａ ｔｏｅｈｏｌｄ?ｍｅｄｉａｔｅｄ ＤＮＡ ｓｔｒａｎｄ ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ． Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅｓ ｃａｎ ｂｅ ｒｅｐｌａｃｅｄ ｗｉｔｈｏｕｔ ｄａｍａｇｅ ｂｙ ｔｈｅ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｅｎｚｙｍｅ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ． Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ， ｔｈｅ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｇａｖｅ ｔｈｅ ｐｏｓｓｉ? ｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｒｅｃｙｃｌｅ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅｓ ａｎｄ ｓａｖｅ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｃｏｓｔ． Ｔｈｅ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｔｒｙｐｓｉｎ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ ｒｅｕｓａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ． Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｍａｉｎｅｄ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ８６％ ａｆｔｅｒ １０ ｃｙｃｌｅｓ． Ａｎｄ ｔｈ